Tribble3基因调控MAPK信号通路在表皮增殖及银屑病皮损形成中的作用

银屑病是常见的慢性炎症性增殖性皮肤病，其发病机制尚未阐明。Tribbles家族是新近发现的调节MAPK信号途径的重要分子。本项目综合国内外的研究现状，在深入分析银屑病皮损形成机制和细胞信号转导途径的基础上，提出trb3/MAPK信号转导途径调控角质形成细胞增殖和细胞因子的表达并在银屑病皮损形成中发挥重要作用的假说。本项目首先观察银屑病患者和健康志愿者皮肤组织中trbs表达差异，验证trbs家族蛋白的存在和作用；并从细胞水平利用分子生物学等技术，将trb3重组基因转导入角质形成细胞细胞，探讨tribble3特异性及trb3/MAPK信号转导途径在表皮增殖、细胞因子的表达中的作用，并运用RNA干扰技术使角质形成细胞内trb3基因沉默，进一步观察其作用。这些研究结果将促进对tribble3生物学功能的认识，有助于阐明表皮增殖和银屑病皮损形成的分子机制，为临床防治银屑病提供新的理论依据和治疗策略。

银屑病是一种常见的多基因遗传、多环境因素诱导的慢性炎症性增殖性皮肤病，大约可累及2%的人群。近年来研究的重要进展之一就是发现了一些起重要调控作用的信号转导通路在银屑病角质形成细胞增殖及细胞因子的表达中起重要作用。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)普遍存在于真核细胞中，在细胞增殖、分化、凋亡、应激、炎症以及免疫反应等过程发挥着极其重要的作用。我们的前期研究表明，银屑病患者皮损中p-ERK1/2 和p-p38 的表达明显增高，MAPK信号可能参与表皮角质形成的增殖和分化过程，但其具体的调节机制还不清楚。TRIBs基因是新发现的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶样蛋白基因家族。人类TRIBs家族包括TRIB1、TRIB2、TRIB3，目前有关TRIB3基因的研究主要集中在TRIB3。最近的研究认为，TRIB3基因是一类重要的信号通路调节蛋白，通过调控CDC25、AKT、MAPK、NF-κB等信号通路参与细胞增殖、分化、凋亡等过程。.我们收集了24例寻常型银屑病病人，均来自山东大学齐鲁医院皮肤科门诊，所有病例均经临床确诊为寻常型银屑病。应用实时定量RT-PCR检测结果表明银屑病皮损中TRIB3 mRNA表达明显高于非皮损和正常表皮，TRIB1mRNA、TRIB2mRNA的表达无明显差异。免疫组化检测结果表明 TRIB1、TRIB2、TRIB3表达于银屑病皮损区、非皮损区和正常人表皮除角质层外的各层细胞；TRIB3位于银屑病表皮细胞的胞浆和胞核中，而在非皮损区和正常人表皮细胞中主要位于胞浆中。TRIB1、TRIB2均微弱的表达于银屑病皮损、非皮损和正常人表皮角质形成细胞的胞浆。培养永生化人表皮角质形成细胞株HaCaT细胞， HaCaT细胞表达TRIB1、TRIB2、TRIB3，其中TRIB3表达最为明显，主要表达于细胞的胞浆和胞核。构建pDNR/TRIB3质粒和TRIB3特异性的小干扰RNA（siRNA）并检测其生物学效应。结果表明TRIB3靶向 siRNA转染HaCaT细胞抑制TRIB3表达后，与对照组相比，TRIB3基因沉默的HaCaT细胞出现生长抑制现象，即细胞数量明显减少；TRIB3基因沉默的HaCaT细胞的G0/G1期比例显著增加；HaCaT细胞培养上清液中IL-18和VEGF表达量明显降低。且siTRIB3组的ERK1/2水平表达量明显降低，p38的磷酸化水平无明显变化。