RNAi技术沉默白细胞介素23基因对哮喘小鼠记忆性T细胞增殖功能的影响

Th2细胞在哮喘发生发展过程中起着重要作用，其中记忆性T细胞是一关键环节。当哮喘机体接触同种过敏源时，记忆性T细胞可增殖活化为Th2细胞、分泌Th2类细胞因子、引发Th2介导的气道炎症。IL-23能够诱导正常小鼠及正常人记忆T细胞的增殖并分泌相关细胞因子，本课题组前期研究已证实抑制IL-23表达可降低哮喘小鼠外周血及脾脏T淋巴细胞培养液中Th2类细胞因子水平、明显减轻Th2介导的气道炎症，因此我们推测IL-23可能通过诱导哮喘小鼠记忆T细胞的增殖来促进Th2细胞活化。本课题拟应用RNAi技术干扰IL-23表达，比较干扰前后哮喘小鼠记忆T细胞数量、记忆T细胞分泌Th1/Th2细胞因子水平、细胞内转录因子表达水平的变化，并应用荧光蛋白质组学方法分析记忆T细胞内差异表达的功能蛋白，从而探讨IL-23、记忆T细胞、哮喘三者的关系，阐明IL-23促进哮喘Th2气道炎症的作用机制并为哮喘防治提供新思路

本项目已完成以下实验内容:.1.支气管哮喘小鼠体内记忆T细胞的发展规律：构建哮喘小鼠模型，于激发前1天始，至末次激发后30天内，监测小鼠脾脏、肺脏中CD4+和CD4-的CD44HighCD62L-细胞的数量变化，结果显示小鼠肺脏CD4+Tm随着激发次数的增加而增高，激发停止后继续升高，9天后开始缓慢下降，脾脏中CD4+Tm的变化与肺脏基本同步。而CD4-Tm虽然也随激发次数增多而增高，但激发停止后短期内迅速下降。这提示CD4+、CD4-Tm均参与哮喘的发病，但作用途径不同，CD4+Tm发挥主要作用。相关成果在多个国际会议做壁报展示，文章发表在《中国实验诊断学》；.2.小鼠淋巴细胞体外培养后表面标记物发生显著变化：将小鼠脾脏淋巴细胞进行体外培养，无论是正常还是哮喘小鼠，其细胞表面标记物CD3、CD4、CD44High、CD62L均发生下调，记忆T细胞的表面标记CD44High、CD62L更为显著，呈明显下调趋势，尤其是CD62L，几近消失。该项发现收录在2014年全美免疫学年会摘要集中。 . 3.干扰IL-23p19基因表达可减轻哮喘气道炎症，可能通过降低CD4+Tm比例发挥作用：应用慢病毒包裹干扰IL-23p19基因表达的质粒，经鼻滴入哮喘小鼠气道，发现小鼠肺组织中炎性细胞、嗜酸性粒细胞浸润减少，IL-4表达减少，Th1转录因子T-bet表达减低，Th2转录因子GATA-3表达减低，Th17转录因子RORC表达无变化，同时CD4+Tm数量减少。这提示一方面CD4+Tm可能是IL-23发挥作用的途径之一，另一方面IL-23不仅影响哮喘小鼠Th2通路，对Th1通路也有影响。文章发表在《Respirology》《中国免疫学杂志》；.4.意外发现纳米载体在细胞转染中的优势：实验中发现，应用慢病毒转染小鼠淋巴细胞毒性较大，造成细胞死亡现象。由于小鼠淋巴细胞为悬浮细胞，换液困难，因而找寻细胞毒性小、可在不换液的情况下进行转染的安全载体成为我们的下一个目标。经过与中国科学院应用化学研究所合作，构建了一系列基于不同物质的纳米载体，并证实其具有良好的药物与基因携载性能，通过多次改造，降低了该类载体的毒性、提高了转染效率，目前正在继续尝试应用该种载体进行转染的体外、体内实验。文章发表在《Colloids and Surfaces B: Biointerfces》