基于差异蛋白质组学技术的名贵中药海马特征性蛋白质与鉴定研究

Variety is the primary premise of quality assurance for traditional Chinese medicine，is also a key factor affecting the quality of traditional Chinese medicine. Serious varieties confusion exists on the animal medicine market, lacking of effective methods for identification. Animal medicine is rich in protein components. Screening characteristic proteins, establishing new methods for identification by protein components has important significance. In our previous research we found that there were serious varieties confusion exists on the valuable traditional Chinese medicine——Hippocampus. The efficacy of adulterants is unknown and most adulterants are rare and endangered wild animals. In this project, we intend to analyze different varieties of Hippocampus using differential proteomics technology——two dimension fluorescence difference gel electrophoresis(2D-DIGE), detect the differences of protein expression profiling, obtain key proteins, and then establish a new rapid method for identification of Hippocampus and its adulterants. This project has important significance for the identification and wild resources protection of Hippocampus, also provide a new way for the identification research of other animal medicines.

中药品种是保证中药质量的首要前提，是影响中药品质的关键内因。动物药市场品种混乱现象严重，缺乏有效鉴定方法。动物药富含蛋白质类成分，寻找特征性蛋白质，从蛋白质角度研究品种鉴定新方法具有重要意义。申请人在前期研究中发现，中药材海马市售品种混乱，混淆品药效不明且多为濒危珍稀野生动物。本项目拟采用差异蛋白质组学技术——双向荧光差异凝胶电泳（2D-DIGE）分析不同来源的海马干药材，利用2D-DIGE高灵敏度、高分辨率的特点，寻找品种因素引起的样本之间蛋白质表达谱的差异，获得海马品种鉴定的关键蛋白；并以寻找到的关键蛋白为鉴定指标，考察正品海马与非药典种海马的区别，建立可用于海马正伪品快速定性鉴别的新方法。课题对名贵中药海马的正确鉴定、解决品种混乱的现状及保护野生海马资源具有重要意义，课题的研究思路能为其它动物药的鉴定研究提供一条可借鉴的新途径。

中药品种是保证中药质量的首要前提，是影响中药品质的关键内因。名贵中药海马市售品种混乱，混淆品药效不明且多为濒危珍稀野生海洋动物。本项目对市售海马药材进行了广泛的收集与基原鉴定。以海马中含量最高的蛋白质类成分为研究对象，首次建立了适合海马干药材蛋白质分析的双向电泳技术方法；并利用这一方法分析了不同品种海马蛋白质组的差异，初步发现了可用于品种鉴定的特征性蛋白质斑点；对16个特征性蛋白质斑点进行了质谱鉴定，鉴定出其中11种；进一步将特征性蛋白质的检测方法转换为单向电泳，建立了可用于海马正伪品快速鉴别的SDS-PAGE检测方法；并利用同位素标记相对和绝对定量技术（ITRAQ）对海马药材进行了蛋白质分析，鉴定出海马蛋白质1032个。本研究对保证海马用药安全有效，保护野生海马资源具有意义；也能为其它蛋白质含量丰富的动物药的鉴定提供可借鉴的研究思路。