Wnt10b调控毛乳头细胞FGF7表达诱导毛囊周期性再生的作用与机制研究

斑秃的毛囊不能从静止期进入生长期，导致毛囊周期性再生功能发生障碍，但其机制不清。本项目在率先证实"Wnt10b能够诱导小鼠毛囊周期性再生"的基础上，对Wnt10b诱导毛囊再生的靶细胞及其作用机制进行研究。本项目拟证实Wnt10b诱导毛囊再生的作用由DP细胞分泌的FGF7介导，在此基础上，通过检测经典Wnt信号通路关键分子表达、检测报告基因和siRNA干扰阻断等方法，从细胞水平阐明Wnt10b经由Wnt10b-Frizzled-β-catenin-LEF/TCF信号链激活DP；并进一步通过EMSA、CHIP实验、截短实验、突变实验等解析出LEF/TCF在FGF7启动子区域的结合位点，从而阐明Wnt10b在转录水平上促进FGF7表达的分子机制。本研究不仅有助于阐明毛囊周期性再生的机制，而且也可为斑秃等毛囊周期性再生障碍相关疾病的发病机制研究提供理论基础，并为开发相关治疗药物提供新的靶点。

本课题实施过程中，按照研究按计划进行研究。一方面，通过原位杂交实验和荧光实验，检测过表达Wnt10b后，毛囊中Wnt10b的表达模式，证实DP细胞为Wnt10b诱导毛囊生长的靶细胞之一；在前期实验的基础上，通过构建ß-catenin的干扰腺病毒，进一步明确Wnt10b通过经典Wnt信号通路诱导毛囊周期性再生。另一方面，将小鼠FGF7全长cDNA构建至带GFP的腺病毒穿梭质粒Admax，构建FGF7过表达腺病毒，同时构建FGF7干扰腺病毒，利用已经建立的在体实验动物模型，进行在体动物实验。干扰FGF7后，毛囊生长未见明显变化，说明机体内存在代偿机制；我们经过多次尝试，建立了一个新的DP细胞培养体系，该DP细胞培养体系稳定性和重复性好，能够长期培养DP细胞，并成功用于DP细胞建系，已申请国家发明专利；利用建立的DP细胞系，我们进一步进行Wnt信号对体外培养的DP细胞作用实验，发现与预期结果不同，LiCl刺激后，DP细胞中经典Wnt信号通路并未明显激活，因此，结合前期实验，我们通过排除法，证明了毛囊干细胞可能为Wnt10b作用的直接靶细胞。除这两方面外，在研究中，我们还建立了CHIP实验平台和双荧光素酶检测平台，用于基因表达调控的研究。.在成果方面，依托本课题，课题组已发表标注基金号的中文核心期刊综述3篇；发表SCI论文1篇，影响因子6.37，发表的同期杂志上同行撰文进行了述评，被引次数13。课题组成员参加了3次国内学术会议交流。其中，在第四届中国医学细胞生物学学术大会上，进行了分会场口头报告。在三次会议上，均获得了学术机构的青年优秀论文奖。同时，课题组负责人依托此课题，赴美国南加州大学进行博士后研究，在Kobielak教授的实验室进行博士后研究。研究方向主要包括两方面，即上皮干细胞的调节机制和皮肤肿瘤发生机制。通过学术交流，除了与导师建立学术合作外，还与多个前沿研究的实验室建立了学术联系。主要的实验室包括南加州大学干细胞与再生医学研究中心的Ying实验室和南加州大学病理系的Chuong实验室。.综上所述，本项目研究超额完成了预期目标，主要体现在发现了新的调控毛囊周期的线索，并发表了高影响因子的SCI文章。下一步拟沿着现有结果进行更深入的研究，研究Wnt信号通路及BMP信号通路如何协同或拮抗对毛囊干细胞进行周期性调控。