用RNA蛋白质印迹试验筛选HBV转录后调节因子cDNA克隆,对国外的方法进行了三方面的改良,提高了筛选效率,(1)改双压片法为单压片法(2)用MMK缓冲液使RNA探针恢复二级结构,(3)用过柱法代替过胶法经纯化RNA探针,减少探针的损失,筛选人肝cDNA文库约25万个克隆,第一筛获得可凝阳性克隆18个,第二筛发现第7号克隆产生强阳性反应,第7号克隆经第三筛达到100%阳性,对该克隆的cDNA进行序列分析并和GenGanK的资料进行比较,发现这一克隆与人的核因子90具有高度同源性,共mRNA的表达水平以心脏,骨髓肌,肾脏,肝脏的含量丰富,将该克隆的cDNA在大肠杆菌中表达,已获得具有RNA结合活性的融合蛋白,我们的工作已超过预期目标并进入“973”项目的子课题。
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数据更新时间:2023-05-31
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