IQGAP1相关信号通路在肺炎衣原体感染诱导血管平滑肌细胞迁移中的作用

血管平滑肌细胞（VSMC）由中膜向内膜迁移是动脉粥样硬化（AS）发生发展的关键环节。肺炎衣原体（C.pn）感染作为AS新的危险因素，与VSMC迁移关系密切，但具体机制尚不清楚。本课题拟用C.pn感染大鼠VSMC，观察IQGAP1相关信号通路在C.pn感染诱导VSMC迁移中的作用：（1）利用免疫共沉淀技术探讨IQGAP1相关信号通路中蛋白分子间的相互作用；（2）应用抑制剂抑制IQGAP1相关信号通路中蛋白的活性，观察C.pn感染对VSMC迁移的影响；（3）应用基因转染和RNA干扰技术分别使IQGAP1表达水平上调、下调，RT-PCR、Western blot鉴定IQGAP1 mRNA和蛋白的表达；观察C.pn感染对VSMC迁移的作用。由此，确定IQGAP1相关信号通路，阐明C.pn感染诱导VSMC迁移的分子机制，寻找有效抑制VSMC迁移的新途径，为AS的治疗提供新思路。

血管平滑肌细胞（VSMC）由中膜向内膜迁移是动脉粥样硬化（AS）发病过程中的关键环节。肺炎衣原体（C.pn）作为AS新的危险因素，与细胞迁移密切相关。但C.pn在VSMC迁移中的作用及机制，目前尚不清楚。本课题利用C.pn感染大鼠VSMC模型，首先观察C.pn感染对VSMC粘附和迁移能力的影响，结果显示，C.pn感染可明显促进VSMC粘附和迁移。为阐明C.pn感染促进VSMC迁移的机制，应用基因芯片技术分析C.pn感染后VSMC基因表达的改变，发现TLR2的表达水平明显升高；共聚焦显微镜下可见TLR2聚集于C.pn包涵体周围；TLR2中和抗体抑制TLR2的作用后，C.pn感染促进VSMC迁移的作用明显被削弱。C.pn被TLR2识别后如何向下游传递信号？利用Western blot和GST-pull down实验分别观察了C.pn感染对Akt磷酸化水平和Rac1活性的影响，结果表明，C.pn感染可上调Akt磷酸化水平和Rac1活性；应用TLR2中和抗体、PI3K抑制剂LY294002或Rac1抑制剂NSC23766分别阻断TLR2、PI3K和Rac1的功能后发现，C.pn感染诱导的Akt磷酸化水平和Rac1活性明显降低，随之细胞的迁移能力也被明显抑制。IQGAP1作为一种肌动蛋白调节蛋白，在细胞迁移过程中起重要调控作用。用RT-PCR和Western blot分别检测C.pn感染对IQGAP1 mRNA和蛋白表达水平影响，结果显示，IQGAP1表达水平总体呈现先逐渐升高而后又逐渐下降的趋势；为证实IQGAP1在C.pn感染诱导VSMC迁移中的作用，应用RNA干扰技术沉默IQGAP1的表达，C.pn感染促进VSMC粘附和迁移的作用被明显抑制。而且，NSC23766可明显抑制IQGAP1的表达，提示C.pn感染可能通过Rac1激活IQGAP1。综上，本研究结果不仅明确了TLR2、P13K、Rac1和IQGAP1在C.pn感染诱导的VSMC迁移中各自发挥重要作用，而且也证实了我们的假说：C.pn感染可能通过激活TLR2-P13K-Rac1-IQGAP1信号通路促进肌动蛋白聚合，诱导VSMC“主动”迁移。本课题初步阐明了C.pn感染促进VSMC迁移的作用及其机制，为进一步揭示C.pn感染致AS的新机制奠定基础，为AS的治疗提供新思路。