基于结核杆菌抗原的肺癌靶向性免疫基因治疗

免疫基因治疗是一种极具应用前景的肿瘤治疗新方法，但目前存在疗效低、副作用大的缺点。本课题申请者拟用端粒酶催化亚单位（hTERT）启动子肿瘤特异性的转录特点，及内部核糖体插入位点(IRES)序列对基因的连接作用，构建结核杆菌抗原Ag85A和Ag85B肿瘤特异性的双基因腺病毒载体；用重组载体转染体外培养的肺癌细胞和正常细胞，用RT-PCR和West blotin方法研究该载体中目的基因表达的肿瘤特异性；建立Lewis肺癌荷瘤小鼠，用卡介苗对荷瘤小鼠进行基础免疫，并从尾静脉注射重组载体，观察该方法对Lewis肺癌的治疗作用，对小鼠淋巴细胞增殖、分化的诱导作用；用免疫组化和western blot方法研究肿瘤组织中Ag85A和Ag8表达情况，用常规HE染色方法研究肿瘤组织和心、肺、肝、肾等重要脏器组织坏死和炎性细胞浸润情况。本课题旨在探索高效、低毒的肺癌靶向性免疫基因治疗新方法。

肺癌是对人类生命和健康威胁最大的恶性肿瘤之一，手术及放化疗等传统治疗效果仍不理想。近年来的研究结果显示，免疫治疗和基因治疗将来可能成为改善肺癌治疗效果最有希望的方法。本课题尝试将结核杆菌抗原基因Ag85A和Ag85引入肺癌的免疫治疗，并用端粒酶催化亚单位（TERT）启动子作为基因转录调控元件，实现基因治疗效应的肿瘤靶向性。以探索一种高效、安全的肺癌靶向性免疫基因治疗方法和途径。在本研究中，课题小组：1、合成了333bp 小鼠TERT启动子，荧光素酶活性实验显示，小鼠TERT启动子在人及小鼠肺癌细胞均有转录活性，而在人和小鼠正常细胞中没有转录活性；2、先后构建了结核杆菌抗原基因Ag85A-Ag85B慢病毒和腺病毒，用Western blot证实了上述抗原基因能在小鼠肿瘤细胞中表达，小鼠TERT启动子作为转录调控元件，可以使Ag85A和Ag85B基因在肿瘤细胞中选择性表达；3、在体外实验中，感染过Ag85A-Ag85B病毒的Lewis与经卡介苗（BCG）免疫的小鼠脾细胞共培养，可以使其产生细胞因子IL-2和IFN-γ显著增加；但流式细胞学检测结果显示，小鼠脾细胞中CD4+细胞和CD8+细胞比例未发生显著改变；4、经尾静脉注射Ag85A-Ag85B病毒，未能抑制Lewis肺癌细胞在BCG免疫小鼠体内的生长；但瘤内注射Ag85A-Ag85B病毒，能显著抑制Lewis肺癌细胞在BCG免疫小鼠体内的生长。本课题结果显示了结核杆菌Ag85A和Ag85B基因用于肺癌免疫基因治疗的可行性。但本研究未能进一步阐明上述结果的具体免疫机制；而且，基于小鼠TERT启动子肿瘤特异性转录活性的治疗效应的肿瘤靶向性优势也未能从本研究的动物实验结果中得到展示。