肿瘤相关基因USP22核心启动子的鉴定及其调控元件分析

USP22（Ubiquitin specific peptidase 22）通过对特异性靶蛋白的去泛素化修饰而发挥广泛的生物学功能，其异常表达是细胞恶性转化的重要标志。USP22如何被激活？目前认为，转录水平是调控的主要环节，但控制转录起始的启动子功能尚不清楚。前期工作中我们定位了USP22基因转录起始点，进而成功克隆上游具有启动活性的片段。本研究以该片段为模板，构建系列5'端续减缺失的萤光素酶表达载体，通过瞬时转染法鉴定核心启动子范围；在此基础上对其中的DNA元件进行突变分析，筛选出调控USP22表达的关键序列；最后利用EMSA、Chip和RNA干扰方法对DNA元件及其结合蛋白的调控活性予以证实。实验结果将以启动子功能性分析为切入点，在转录起始水平探讨影响USP22表达的关键因素，为揭示USP22在肿瘤进展中表达失控的机制，进而确立其作为临床诊断和治疗的新靶点奠定基础。

USP22基因的显著特征在于其在多数肿瘤细胞中高表达。本项目的研究目标是通过界定USP22启动子的核心区域，筛选、鉴定其中关键DNA元件及其转录因子，以部分阐明USP22的转录调控机制。经过三年研究工作，我们如期完成了课题的预定目标。迄今为止，本课题组在国内外核心期刊已发表署名国家自然科学基金项目资助的研究论文6篇，包括SCI论文2篇。我们主要的研究结果包括：1.定位了USP22基因的转录起始点；2.克隆了2.9kb的启动子序列并对该序的转录活性进行分析，界定出包含转录起始点在内的210bp的基本启动子区域；3.在USP22基本启动子区我们发现了Sp1结合位点，该位点对于USP22的转录起负性调控作用；4.USP22的转录激活受到组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA的调节，该抑制剂通过抑制RNA聚合酶PolII与USP22启动子的结合而发挥作用。.以该项目为依托，培养硕士研究生1名.本研究为揭示USP22表达调控机制，研究其在肿瘤增殖、转移中的作用奠定基础。