CcLFY基因启动子核心元件鉴定及其调控蛋白研究

CcLFY基因是申请人从山核桃中克隆出来的LFY同源基因,是调控花分生组织启动的关键基因。利用锚定PCR技术从山核桃基因组DNA中获得了CcLFY基因起始密码子（ATG）上游序列1302bp，经gusA检测，证明该序列具有启动gusA基因的活性。利用PlantCARE软件对该序列分析，发现4个光受体相关调控元件，2个生长素相关调控元件。本研究拟通过PCR获得系列缺失序列,构建表达载体；通过农杆菌介导转化烟草叶片，在不同光照强度、光照时间及不同的生长素处理下，利用组织化学染色、RT-PCR（定量PCR）和Northern blotting对gusA基因表达定性、定量分析，确定启动子核心元件，进一步对核心元件进行碱基突变，确定启动子核心元件中的核心序列。利用酵母单杂交技术分离获得与核心序列相结合的蛋白质及蛋白质编码基因。