长链非编码RNA—SRA调控肝脏PPARγ转录活性，促进小鼠非酒精性脂肪肝发展的分子机制研究

Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), formed by over-accumulation of fat in hepatocytes, damages the hepatic function and can lead to hepatosteatosis, cirrhosis or hepatocellular carcinoma. The complexity of NAFLD leads to the poor understanding of its pathogenesis. Due to the multiformity and universality in gene regulation, long non-coding RNA (lncRNA), become the ideal pathway to explore the mechanism of NAFLD. For the first time, we found that SRA, a kind of lncRNA, was deeply involved in the regulation of PPARγ, the transcriptional factor facilitating NAFLD development. This kind of regulation affects the expression of genes related to lipid metabolism, which results in the resistance of SRA deficient mice to high fat diet-induced hepatic steatosis. Measures would be taken to reveal the way and pathological significance that SRA regulates PPARγ: ①To search the cofactors interacting PPARγ in the mediation of SRA; ②To analyze the effect of SRA-induced histone modification on the activity of PPARγ; ③To analyze how the regulation of PPARγ by SRA affects the development of NAFLD in animals. Based on the study of PPARγ, this project reveals how SRA affects hepatic lipid metabolism, and lays the foundation for precise therapy of NAFLD.

非酒精性脂肪肝是因为肝细胞内脂肪过度堆积损害肝脏功能，并可诱发脂肪性肝炎、肝硬化或肝癌的病变。其发病过程复杂，目前对其认知依然十分有限。长链非编码RNA（lncRNA）的基因调控模式多样且调控范围广泛，是探索脂肪肝发病机制的理想突破口。我们新近发现，在肝脏和肝细胞中SRA（一种lncRNA）同促发脂肪肝的转录因子PPARγ有着紧密调控关系。这种调控对肝脏脂代谢基因表达的影响，可能是SRA缺失小鼠抵御高脂饮食诱导肝脂沉积的原因。为进一步阐明该调控模式的分子机制和病理意义，本项目拟进行以下工作：①寻找SRA介导下作用于PPARγ的辅因子；②分析SRA组蛋白修饰作用对PPARγ活性的影响；③在整体动物水平考察SRA调控PPARγ对脂肪肝发展的影响。本项目以PPARγ为引揭示SRA调节肝脏脂代谢的分子机制，为全面了解非酒精性脂肪肝的病理过程继而进行精准治疗打下基础。

非酒精性脂肪肝是因肥胖、脂代谢紊乱等原因引发肝细胞内脂肪积聚的病变，也是脂肪性肝炎、肝硬化甚至肝癌的病理起点。阐明其内在发病机理是有效防治非酒精性脂肪肝的必然选择。我们发现一种长链非编码RNA——SRA在非酒精性脂肪肝模型小鼠肝脏中异常上调。敲除SRA后，小鼠可抵抗高脂饮食诱导的肝脏脂肪变性，同时肝脏中调控脂肪合成基因的关键转录因子PPARγ，其表达水平也显著下调。但是当我们使用PPARγ腺病毒载体向小鼠肝脏导入外源性PPARγ，SRA表达水平的改变并不影响肝脏脂肪含量，说明SRA通过调控PPARγ表达水平而非调控其转录活性影响肝脏脂肪代谢。我们排除了SRA对PPARγ蛋白和mRNA稳定性的影响，证明SRA通过调控PPARγ的转录过程上调其表达。有趣的是，仅仅上调肝脏SRA水平并不诱发肝脏脂肪变性和PPARγ的表达，我们推测SRA通过激活某个PPARγ转录因子助推PPARγ的表达，因此我们利用荧光报告基因系统筛选出受SRA调控的PPARγ转录因子C/EBPβ，并在在体实验中证明C/EBPβ对肝脏脂肪沉积的贡献受到SRA影响。最后我们利用荧光报告基因系统筛选出p300和CBP两个辅因子，证明SRA促进p300和CBP对C/EBPβ的激活作用，加速PPARγ的转录。鉴于SRA敲除小鼠并没有任何异常表现，因此将SRA作为治疗非酒精性脂肪肝的靶点应当安全有效。