在转基因植物中抗冻肽基因表达的研究

我们合成了苷薯信号肽和适合于植物和E.coli中表达的修饰冬鲽抗冻肽（AFP）嵌合基因。构建了植物信号肽下游AFP时——、四、八联体基因。用QIAGEN细菌表达系统在E.coli中诱导表达了DHFR--AFP融合基因，说明修饰的AFP基因在E.coli中能转录和翻译。在此基础构建了含报道基因GUS的植物组成型和热激诱导型AFP、四、八联体两套表达载体，转化烟草，荧光检测筛选了瞬间表达的转基因植株。为了在Westernblot中免疫检测AFP，AFP四、八体基因中删除植物信号肽，pQE40载体中删除DHFR基因，重新构建了带有纯化标签6×His的四、八体基体，用Ni-TNA亲合层析柱纯化，做抗原免疫家兔制备了抗体，为在转基因植株中证实AFP活性与耐寒性的相关性乃是此项研究的下一步目标。