靶向造影微泡在腹部实质脏器创伤渗血诊治中的研究

Slow bleeding of traumatic abdominal parenchymal organs or errhysis after invasive treatment, which is insidious, can easily be missed diagnosis. Once the condition is suspected of continue bleeding or errhysis, laparotomy must be implemented, for the main reason is lack of effective diagnostic methods. Studies have shown that at the local part of post-traumatic bleeding, a large number of platelets aggregates ,are activated rapidly and express high concentrations of platelet GPⅡb／Ⅲa receptors. The compositions of microbubbles shell, good drug carriers, can easily be modified on surface, which can develop target tendency. Based on the above, we propose the study of targeted microbubbles diagnosis and drug-loaded target microbubbles treatment of slow bleeding after traumatic abdominal parenchymal organs. We intend to target the high concentrations of platelet GPⅡb／Ⅲa receptors on the bleeding site, through the development of lipid membrane contract microbubbles which is pro-platelet GPⅡb／Ⅲa receptors, and the tendency will make the microbubbles orient the target, gather and combine with receptors. By the high ratio of target and background contrast, accurate diagnosis of traumatic hemorrhage can be achieved. On this basis, we also intend to develop hemostatic-loaded microbubbles which can combine with receptors, make them release the ligands by high-energy, low-frequency ultrasound irradiation and play a role of hemostatic.

腹部实质脏器创伤后缓慢出血或微创治疗后仍存在渗血时，病情隐匿，一旦怀疑持续渗血，不得不剖腹探查手术，究其原因主要是对缓慢出血缺乏有效的诊断方法。研究显示，创伤后出血局部会出现大量血小板聚集，聚集后的血小板迅速被激活，表面能够表达高浓度的血小板GPⅡb／Ⅲa受体；加之，构成微泡造影剂外壳的成分容易进行表面修饰，形成靶点趋向性，而且这些外壳成分又是药物的良好载体。于此，我们提出了腹部实质脏器创伤后缓慢出血的靶向微泡的诊断和载药靶向微泡的治疗研究。拟以创伤出血部位高表达的血小板GPⅡb／Ⅲa受体为靶点，研制亲血小板GPⅡb／Ⅲa受体的脂膜造影微泡，利用靶向微泡的靶点趋向性使造影微泡定向结合并聚集到出血部位，通过靶点与背景的高比率对比实现创伤出血的准确诊断；在此基础上，研制携载止血药物的靶向微泡，使该微泡能够在靶点结合、聚集；通过高能低频超声辐照使结合到靶点上的微泡配体定点释放，发挥正常止血作用。

为研究靶向微泡在腹部实质脏器创伤渗血诊断及治疗中的作用，本课题采用机械震荡法制备了脂质超声造影微泡（MB），并通过化学共价法连接血小板GPIIb/IIIa受体特异性蛋白序列RGD多肽，使之成为靶向造影微泡（MB-RGD），并检测其一般特征，如粒径、电位、靶向连接率、体外显影等，使之能与普通超声造影剂一样，能够达到体内显影的要求。在兔肝脏创伤渗血诊断中，通过静脉注射MB-RGD，其与普通超声造影剂相比，在后者不能诊断的渗血中，靶向微泡发挥了作用，通过超声定量分析仪对创伤灶部位定量分析，肯定了前者的优势。在微泡载药方面，课题选取了载药量更多的PLGA材料进行微球制作，并对载药微球的粒径、电位、连接率、光镜、电镜下观察其一般特征，同时进行药物释放实验，选取抗纤溶药物氨甲环酸作为携载药物，并在鼠肝脏创伤模型中进行实验，从鼠的失血量、出血时间、干增重及荧光病理方面对不同载药微球进行综合比较，从不同方面对载药微球止血作用进行评价，取得了较为理想的效果。综上，机械振荡法制备RGD靶向脂质微泡方法简单，成泡率高，粒径均一，分散性好，体外靶向性好，体内外显影效果好，对于渗血可以靶向显影，可尝试作为诊断肝脏创伤渗血的对比显影剂，为临床诊断提供新思路。双乳化法制作的载氨甲环酸靶向PLGA微球粒径均匀，分散性好，包封率及载药量可，其具备靶向及载药双重功能，可作为止血剂静脉注射用于肝脏创伤后渗血治疗。