供体特异性抗体在小肠移植排斥反应中作用机制研究

小肠移植远期疗效不理想，慢性排斥反应是导致该问题的关键因素。虽然针对T细胞的治疗措施能有效地减轻急性排斥反应，但未解决移植小肠长期存活与诱导免疫耐受形成问题。我们的研究发现，小肠移植术后的排斥反应，不仅与T细胞，而且还与B细胞及其分泌的抗体密切相关；提示除针对T细胞的治疗之外，还有赖于有效地控制B细胞及其分泌的抗体，才能保证移植小肠的长期存活。因此，本课题拟应用小鼠小肠移植模型、B细胞剔除以及抗体分泌抑制技术，通过：1）建立小鼠小肠移植模型，观察免疫球蛋白缺陷对术后排斥反应的时间、类型和严重程度的影响；2）探讨输入供体特异性抗体对重建动物的排斥反应能力影响；3）观察阻断T细胞依赖性B细胞抗体分泌或补体激活能否防止或延缓慢性排斥反应等研究，阐明B细胞及其分泌的抗体在小肠移植中的作用机理。为进一步揭示排斥反应的发病机制，探讨新的防治策略，提高小肠移植治疗水平提供理论依据和技术方法。

摘要：小肠移植术后的排斥反应不仅与T细胞，而且与B细胞及其分泌的抗体密切相关。临床上除针对T细胞的治疗之外，还有赖于有效地控制B细胞及其分泌的抗体，才能保证移植小肠的长期存活。本项研究拟通过小鼠小肠移植模型，研究抑制B细胞及其抗体分泌对急性和慢性排斥反应的影响，从而延长移植物的存活时间。方法：1）建立原位小鼠小肠移植模型；2）利用免疫球蛋白缺陷小鼠和输入外源性抗体，研究供体特异性抗体与排斥反应的关系；3）通过阻断共刺激信号通路，研究对T细胞依赖性抗体分泌和慢性排斥反应的影响；4）利用抗补体C5抗体，研究抑制补体活化途径是否能够延缓排斥反应。结果表明，B10.A移植到野生型C57BL/6小鼠迅速发生急性排斥反应，而在免疫球蛋白缺陷小鼠30%移植物存活时间达15天以上。ELISA方法显示两组动物血清IL-2, IFN-γ, IL-4, 和 IL-10水平无明显差别，说明免疫球蛋白缺陷小鼠具有正常的细胞免疫功能。在野生型小鼠移植物CD4和CD8阳性细胞浸润，IgG、IgM和补体沉积；而在免疫缺陷小鼠免疫沉积物明显减少。研究表明，给免疫缺陷小鼠输入供体特异性IgG2b单抗能够恢复排斥反应能力。实验进一步研究了阻断共刺激信号通路对抗体分泌和小肠移植排斥反应的作用。移植后给予CTLA4Ig单抗不能阻止野生型小鼠发生排斥反应，但能延长T细胞免疫缺陷小鼠移植物存活时间。联合使用CTLA4Ig和抗CD154单抗能够降低抗体分泌，显著延长移植小肠存活时间。利用第三方皮肤试验，证明长期存活小鼠未发生免疫耐受。本课题还利用小鼠模型探讨阻断补体活化途径对小肠排斥反应的作用。实验显示，将B10.A小鼠皮肤移植到C57BL/6小鼠，二周后即可产生供体特异性抗体。小肠移植后迅速出现排斥反应，移植肠粘膜下广泛血栓形成和补体沉积，符合抗体介导的排斥反应表现。采用抗C5补体抗体阻断抗体活化途径，再结合低剂量他克莫司能够阻止急性排斥反应。实验证明抑制补体活化有望成为防治致敏病人排斥反应的重要手段之一。总之，小肠移植排斥反应与供体特异性抗体有密切联系，抑制抗体可以明显延长排斥反应的发生时间，为进一步揭示排斥反应的发病机制，探讨新的防治策略，提高小肠移植治疗水平提供理论依据和技术方法。