慢病毒载体结核病治疗性疫苗的研究

多重耐药菌株的出现是近年来全球结核病疫情肆虐的主要原因之一。目前抗痨药物大多无法杀死生长缓慢或休眠的细菌。结核病治疗性疫苗可以诱发抗原特异性细胞毒性T细胞（CTL）免疫应答，杀死细胞内寄生的结核杆菌。国内外的研究表明治疗性结核病疫苗与抗结核药物的联合使用，不仅能够杀死活跃复制的结核杆菌，并可提高机体免疫力，从而显著提高化疗效果，缩短疗程。本研究中，我们采用来源于人类HIV的去除了毒性基因改造而来的第三代慢病毒载体FUW，重组结核杆菌重要抗原及结核免疫相关重要细胞因子的融合基因，如ag85B-Rv3425、ag85B-IL2等，构建新型治疗性疫苗。通过疫苗与抗痨药物异烟肼和利福平联合使用，对感染耐药结核菌的小鼠模型进行治疗实验，以期筛选到高效治疗性结核病疫苗，能够与抗痨药物联合使用有效治疗耐药结核病。为耐药结核病的治疗开辟新途径。同时，深入探讨含有融合基因的治疗性疫苗对结核病的免疫治疗机制。

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的重大传染性疾病，严重威胁人类健康。近些年来，耐药结核菌株的出现和HIV感染使得结核病的防治形势更加严峻。目前临床上应用于治疗结核感染的抗结核药物存在治疗周期长，副作用大等诸多问题，导致病人服药的依从性低，在一定程度上加剧了结核病的复发以及耐药结核的产生。因此，探索结核病治疗新模式，成为目前亟待解决的问题。 . 治疗性结核病疫苗主要用于接种已感染结核分枝杆菌的个体。治疗性疫苗可逆转发生在疾病进展期的非保护性免疫反应，使其向Th1型反应发展；能打破机体的免疫耐受，有效激发宿主针对结核分枝杆菌以抗原为基础的细胞免疫反应，诱发抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞免疫反应，来清除胞内寄生的结核分枝杆菌。治疗性疫苗将有助于防止潜伏结核病的复发；与药物联合使用以提高药物的治疗效果，尤其是针对耐药结核病的治疗。. 本研究中，我们开发了一种新型的结核病治疗性疫苗，即慢病毒载体表达结核菌融合抗原Ag85B-Rv3425的疫苗，可以有效治疗小鼠结核感染。 我们首次将慢病毒作为结核病治疗性疫苗的载体，构建相关载体并包装出可以表达融合抗原Ag85B-Rv3425 (简称A3)的重组慢病毒，通过小鼠体内实验证明通过重组慢病毒足垫单次免疫可以有效诱导融合抗原A3在小鼠体内表达并激发相应的免疫反应。小鼠体内表达的A3融合抗原经过抗原递呈识别过程，可以刺激特异性的T淋巴细胞增殖，增加小鼠体内特异性CD4+，CD8+ T淋巴细胞的比例，引发小鼠体内产生针对特异性抗原的Th1型免疫反应，增强Th1型细胞因子IFN-gamma，IL-2的分泌表达，显示出良好的抗结核潜力。 . 为了检测重组慢病毒对于结核病的免疫治疗效果，我们利用尾静脉攻毒方式对C57BL/6小鼠进行了结核菌感染，对感染后的小鼠进行免疫治疗实验。治疗策略为通过足垫免疫的方式向小鼠体内注射重组慢病毒，治疗8周后，相对于对照小鼠，经过重组慢病毒治疗的小鼠肺脏内的结核菌量下降了2/3，体重明显上升，表明重组慢病毒对于感染小鼠体内的结核菌具有清除作用，表达融合抗原A3的重组慢病毒表现出良好的结核病免疫治疗前景。