基于多靶点的刺山柑提取物抗类风湿关节炎作用机制及药效物质基础的研究

Capparis spinosa L,planted in Xinjiang ,is an abundant plant resource, and it is necessary tosearch the application of C. tinctoria. We found the extract of Capparis spinosa L (CCT) has antiRA effect in pre-experiment, however, the mechanismand pharmacodynamic material basis have not yet been elucidated. Based on the active fraction of antiRA effect (CCTE), the regulating effect of Th17 and Treg cells ,inflammatory mediator and Cytokine, JNK1,ERK1,p38 and MT1-MMP expression of synovial tissue,MT1-MMP expression at immunocytes will be investigated to illuminate the antiRA mechanismof CSGE by LC-MS/MS, flow cytometry, fluorescence quantitative PCR , ELISA, immunohistochemistry, Immunofluorescence and laser confocal in this study. The methods pharmacokinetics will be used to investigated the antidRA pharmacodynamic material basis of CSGE by the LC-MS/MS and pharmacological experiment. The result of this study will facilitate the development of Capparis spinosa L and the economy of Xinjiang medicine.

刺山柑主要生产于新疆，作为一种资源丰富的药用植物，需要挖掘其用途。项目组预实验发现刺山柑提取物（CSG）具有抗RA的作用，但其作用机制及药效物质基础尚未阐明。本课题从动物整体、细胞及基因分子水平利用LC-MS/MS、流式细胞术、荧光定量RT-PCR、ELISA、免疫组化、免疫荧光及激光共聚焦等技术，在明确CSG抗RA活性部位（CSGE）的基础上，着重考察CCGE对RA的Th17和Treg细胞调节作用、炎症介质和细胞因子、关节滑膜组织ERK1/2，p38和MT1-MMP表达及滑膜和免疫细胞上MT1-MMP的表达，阐明其多靶标抗RA作用机制；结合前期已分离纯化的总黄酮，本课题拟借助LC-MS/MS技术及药效实验，与“药代动力学”有机结合，阐明与CSGE抗类风湿关节炎作用相关的效应物质；本课题的完成，对基于新疆刺山柑开发抗类风湿类药带动新疆地方经济均具有重要意义。

刺山柑主要生产于新疆，作为一种资源丰富的药用植物，需要挖掘其用途。项目组预实验发现刺山柑提取物（CSG）具有抗RA的作用，但其作用机制及药效物质基础尚未阐明。本课题从动物整体、细胞及基因分子水平、LC-MS/MS技术及药效实验初步阐明其多靶标抗RA作用机制及药效物质基础。.通过体外抗氧化实验，筛选活性最佳的刺山柑萃取物刺山柑正丁醇萃取物(CSGE)。利用CSGE分别干预MH7A细胞，采用CCK-8比色法检测MH7A细胞的增殖状况，流式细胞术检测MH7A细胞的凋亡情况。此外，通过建立牛Ⅱ型胶原诱导型关节炎（RA）大鼠模型，利用蛋白芯片技术测定各组大鼠血清中与RA相关的炎症细胞因子，并进行GO富集分析及KEGG信号通路富集分析。以大鼠足趾外观变化、滑膜组织病理变化及大鼠外周血样中CD4+、CD25+、FOXP3+、CD25+FOXP3+、IL-17+、CD4+IL-17+表达水平探究CSGE对RA的作用机制。在以上研究基础上，进一步利用网络药理学与分子对接，开展CSGE抗RA作用机制研究。.CSGE对MH7A细胞的增殖具有明显抑制作用，并且能够诱导其发生凋亡。蛋白芯片检测结果显示：CSGE能够显著下调RA的促炎细胞因子，上调抑炎细胞因子；CSGE具有缓解足趾肿胀、改善大鼠滑膜细胞分布混乱、纤维细胞分布不均匀、滑膜细胞破裂、细胞核外溢、滑膜组织呈现断裂并有肉芽生成等病理状况的作用，能够有效调节RA大鼠外周血Treg水平上升、Th17水下降；CSGE能抑制MH7A细胞迁移，并可负调节P-JNK、P-STAT3信号通路，并抑制MMP-1、MMP-9、MMP-13蛋白表达；网络药理学筛选出合适的活性成分以及靶点蛋白，槲皮素、木犀草素及异鼠李素三种活性成分与靶点蛋白AKT1、PTGS2、MMP-9、MAPK14四个靶点进行分子对接；发现槲皮素、木犀草素及异鼠李素与AKT1、PTGS2、MMP-9、MAPK14等关键靶点具有较好的结合活性，其中活性成分与MMP-9的对接评分最低。.以上的开展CSGE抗类风湿性关节炎的作用机制研究，为刺山柑果实创新药物的研发提供参考和科学依据。