HLA-G异构体分子（HLA-G1～-G7）在卵巢癌肿瘤免疫中的作用及机制研究

The induced expression of the immunotolerant HLA-G were observed in various malignancies and play critical roles in the pathogenesis and progression of the diseases. Due to its primary transcript alternative splicing, seven isoforms were produced (HLA-G1～HLA-G7). Our previous study showed that the HLA-G1 isoform expression was strongly associated with the HO-8910 ovarian cancer cell line tumorigensis and invasiveness. However, a sysmetic evaluation the significance of all seven HLA-G isoforms remains to be explored in ovarian cancer tumor immunology. In this study, we cloned and expressed the HLA-G1～HLA-G7 isoforms in the HLA negative above mentioned HO-8910 ovarian cancer cell line, respectively. With these HLA-G transfectants, a systmatic analysis will be performed to explore the roles of each specific HLA-G isoform on the T and NK cell cytotoxicity and the profile of cytokine production; roles of HLA-G isofrom on the capability of the tumor cell HO-8910 migration and invasiveness in vitro. Furthermore, a mouse tumor model with these HLA-G transfectants with Balb/c，nu/nu mice will be established to explore the roles of each HLA-G isoform on the tumor development, metastasis and mouse survival.Taken together, this study would provide further valuble understanding of significnace of HLA-G isofroms in tumor immunology.

免疫耐受分子HLA-G与肿瘤发生发展密切相关。HLA-G mRNA编码产生7种异构体分子（HLA-G1～-G7）。我们研究发现，HLA-G1表达与卵巢癌细胞成瘤及转移能力直接相关，但HLA-G1～-G7异构体在卵巢癌肿瘤免疫中尚缺乏体外及荷瘤动物模型系统比较研究。本项目在前期研究基础上，以卵巢癌细胞HO-8910及临床病例为研究对象，系统分析、比较HLA-G1～-G7分子在卵巢癌细胞上表达前后对免疫细胞功能、肿瘤细胞迁徙及侵袭能力的变化；通过Balb/c裸鼠，建立分别表达HLA-G1～-G7异构体分子的卵巢癌荷瘤模型，分析7种不同HLA-G异构体分子对肿瘤细胞成瘤能力、脏器转移及小鼠生存时间的影响；通过卵巢癌病例，分析HLA-G异构体mRNA及蛋白表达与卵巢癌患者临床特征及预后的关系，阐述特定HLA-G异构体分子在卵巢癌发生发展中的作用及其机制，为肿瘤生物学治疗提示新的理论基础和实践探索。

免疫耐受分子HLA-G能在多种肿瘤细胞表面表达，与肿瘤发生发展密切相关，是潜在的肿瘤免疫治疗靶点。HLA-G mRNA 编码产生HLA-G1～G7 7种异构体分子。研究发现，HLA-G1表达与卵巢癌细胞成瘤及转移能力直接相关，但不同异构体在体外功能及荷瘤动物模型中的作用尚不清楚。本项目克隆HLA-G 7种异构体编码基因，通过重组、转染，获得稳定表达HLA-G1～HLA-G7的细胞系，研究不同异构体对NK细胞杀伤功能及叠加效应的影响；通过荷瘤小鼠动物模型，研究HLA-G异构体分子对肿瘤脏器转移及小鼠生存时间的影响；利用免疫组化方法研究HLA-G异构体在卵巢癌和其他肿瘤组织中的表达及其与患者临床特征及预后的关系。. 研究发现：（1） HLA-G异构体依赖其表达量的高低发挥免疫抑制功能，不同程度表达的HLA-G1或 HLA-G5抗原均能显著抑制NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，两者具有累加效应，可溶性HLA-G5比膜结合型HLA-G1具有更强的抑制NK细胞杀伤活性的能力。（2）利用转染HLA-G1～-G7的细胞系接种Balb/c nu/nu裸鼠，结果发现，HLA-G1～-G7组不同程度导致小鼠生存时间缩短，其中HLA-G5组有明显的耳部肿块、偏瘫等症状，有明显的脑转移及心脏转移，小动物PET（microPET）影像学扫描发现肿瘤转移灶存在。（3）利用免疫组化方法研究HLA-G异构体在卵巢癌组织中的表达，发现79.7%的卵巢癌组织表达HLA-G5及HLA-G6，但与卵巢癌患者的组织类别、年龄、临床分期及患者预后无直接相关性。（4）研究结果显示34%的肺癌组织标本表达HLA-G5及HLA-G6，与患者的年龄、性别、淋巴结转移、临床分期及患者预后无直接相关性。但HLA-G5及HLA-G6的表达在区分鳞癌或腺癌组织类型中具有重要意义。（5）研究发现胃癌患者sHLA-G和DC-10显著升高。sHLA-G可作为胃癌诊断的潜在生物标志物，sHLA-G与CA125、CA19-9和CA72-4等联合检测可提高胃癌的临床筛查和诊断水平。本项目的研究揭示了HLA-G异构体分子在卵巢癌等发生发展中的作用，为肿瘤诊断及免疫治疗提供理论基础。