基于HLA-G为靶点的抗卵巢癌免疫干预策略及效应研究

免疫耐受分子HLA-G在卵巢癌等多种肿瘤组织细胞上特异性表达，与肿瘤细胞免疫逃避，肿瘤发生、发展及患者不良预后密切相关，是一个潜在的、非常有价值的肿瘤免疫治疗靶点。 本课题通过干扰HLA-G分子表达、阻断HLA-G分子与免疫细胞受体结合及诱导T细胞免疫应答等策略，体外研究各种免疫干预措施（包括干扰RNA影响HLA-G分子表达、抗体中和及阻断HLA-G与受体的相互作用、HLA-G抗原肽诱导抗原特异性细胞毒性Ｔ细胞应答等）对NK和T细胞功能的影响，以及干预前后卵巢癌细胞增殖生长及迁徙侵袭能力的变化。根据体外研究结果，最佳免疫干预措施将通过人Ｔ淋巴细胞或/和ＮＫ细胞免疫重建的卵巢癌荷瘤SCID小鼠，观察HLA-G干扰前后小鼠体内卵巢癌成瘤、生长、转移情况，以及对小鼠生存时间的影响，探讨以HLA-G为靶点的免疫干预措施在卵巢癌中的抗肿瘤作用，为卵巢癌的免疫治疗提供新策略。

恶性肿瘤组织细胞普遍存在HLA-G 表达异常升高,与肿瘤的发生发展及临床结局关系密切。研究显示，与肿瘤细胞不同，癌旁及正常组织并不表达HLA-G，因此，HLA-G分子是肿瘤免疫治疗中一个极具潜力的靶点。. 本课题组克隆HLA-G编码基因，通过重组、转染，使HLA-G1在卵巢癌细胞株HO-8910上表达（HO-8910G），通过体外、动物体内及临床病例研究，主要有以下发现：（1）HO-8910G细胞体外迁移及侵袭能力显著高于HO-8910细胞，且HO-8910G细胞具有形成类瘤小体的能力。（2）NK细胞对HO-8910G的杀伤能力与HO-8910相比显著降低。NK细胞对肿瘤细胞的杀伤能力与HLA-G分子的表达水平直接相关，且膜表面表达的HLA-G1分子与可溶性HLA-G5分子具有协同作用的特点。HLA-G 特异性抗体87G或其受体KIR2DL4 特异性抗体#33阻断后，均能明显恢复NK 细胞的杀伤功能。除通过与表达在NK细胞上的受体ILT2和ILT4直接结合诱导免疫抑制外， NK细胞能通过细胞间的相互接触转移快速获取K562-G1细胞表面的HLA-G1蛋白（Trogocytosis机制），抑制其杀伤活性，且HLA-G经抗体阻断后，并不影响NK细胞对HLA-G的获取。（3）Balb/c，nu/nu荷瘤实验发现，HO-8910G细胞的转移及侵袭能力、肿瘤形成能力显著增强；HO-8910G荷瘤裸鼠瘤体生长快，脏器转移能力提高，小鼠生存时间明显缩短。此外，HO-8910细胞表达HLA-G1可上调MMP-15分子表达，促进HO-8910细胞的转移及侵袭能力。（4）MMP-15分子经siRAN“静默”后，HO-8910G细胞转移及侵袭能力显著下降，Balb/c，nu/nu荷瘤小鼠的生存时间得到延长。（5）32例卵巢癌及其正常癌旁组织标本免疫组化结果显示， HLA-G与MMP-15分子的表达具有显著相关性（(R= 0.661)。HLA-G与MMP-15分子表达与卵巢癌转移的危险系数分别为5.71及30.0。. 本项目已发表论文23篇，其中SCI论文10篇；会议论文9篇，其中国际会议特邀报告2篇；申请发明专利1项，参与授权发明、实用新型专利各1项。主编著作1部，参编4部，其中国际专著2部。培养硕士研究生2名。任第六届，第七届HLA-G国际大会（巴黎）学术委员及会议主持。