基于抗氧化应激损伤研究广西五眼果干预上尿路结石及其机制

This project focus on calcium oxalate urinary disease which is world-wide common, multiple, cure high recurrence rate of urinary system diseases, study on anti-kidney stone effects and its mechanisms of Choerospondias axillaris with exact antagonistic effect. Preliminary results suggest that Choerospondias axillaris has a good resistance to oxidative stress injury and exact lower oxalate, calcium in urine and kidney on animal model of calcium oxalate urinary stones. This project intended in calcium oxalate-agar coagulation rubber I dimension/II dimension system, and HKC cell system and overall animal model system, used XRD, and FTIR, and SEM and conductivity rate method to determine or characterize calcium oxalate crystal after Choerospondias axillaris intervention. Detected oxidation stress injury related index by colorimetry method. Used immunohistochemistry method, and Western Blotting and the confocal laser scanning methods to observe anti-oxidation stress effects of Choerospondias axillaris on HKC cells damage induced by oxidative stress and calcium Oxalate crystal and OPN protein and mRNA of expression in calcium oxalate stones animal model. The results mentioned above we got can high througthput screen effective components or components for anti-calcium oxalate stones. We will evaluate the anti-calcium oxalate stones effects and its mechanisms in multilayered and multi-angles of protection oxidation stress. As result, it will provide scientific basis for rational development and utilization of Choerospondias axillaris.

本项目针对草酸钙型上尿路结石这一世界范围常见、多发、治愈后复发率高的泌尿系统疾病，选择具有确切对抗作用的五眼果进行基础性研究。前期初步研究结果提示五眼果具有良好的抗氧化应激损伤作用，并对草酸钙型上尿路结石动物模型具有确切的降低尿草酸、尿钙、肾草酸及肾钙作用。本项目拟在草酸钙-琼脂凝胶一维/二维体系、HKC细胞体系和整体动物模型体系中，采用XRD、FTIR、SEM和电导率法等方法测定或表征五眼果作用后的草酸钙晶体，比色法研究氧化应激损伤相关指标，免疫组化、Western Blotting和激光共聚焦技术等观察五眼果影响氧化应激、草酸钙结晶损伤HKC后以及草酸钙结石动物OPN蛋白及其mRNA的表达，高通量筛选出五眼果抗草酸钙型尿结石的有效组分或成分，并从保护氧化应激损伤上皮细胞和影响草酸钙结晶成核、生长、聚集过程等方面，多层次、多角度评价其作用机制，为合理开发利用五眼果提供科学依据。

本项目针对草酸钙型上尿路结石这一世界范围常见、多发、治愈后复发率高的泌尿系统疾病，选择具有确切对抗作用的五眼果进行基础性研究。前期初步研究结果提示五眼果具有良好的抗氧化应激损伤作用，并对草酸钙型上尿路结石动物模型具有确切的降低尿草酸、尿钙、肾草酸及肾钙作用。本项目在草酸钙-琼脂凝胶一维体系,采用XRD、生物显微镜观察法等方法研究五眼果不同提取部位对草酸钙晶体晶型的影响以筛选五眼果有效部位；在HKC 细胞体外体系，采用MTT法、比色法等方法研究H2O2氧化应激损伤细胞相关指标以评价五眼果不同提取部位抗氧化应激能力；在肾结石小鼠模型体系中，采用生化测定法、病理形态观察法、免疫组化法等方法研究五眼果有效组分对肾结石小鼠血液和尿液生化指标的影响以及对肾结石引起肾脏组织病理变化的保护作用，并测定肾脏组织OPN蛋白的表达，以整体评价五眼果有效组分抗草酸钙结石的作用及其机制。结果表明，本项目组构建的草酸钙-琼脂凝胶一维体系能高通量快速的体外筛选出五眼果抗草酸钙型尿结石的有效组分，并能在草酸钙结晶成核、生长、聚集等形成的各个阶段评价药物活性，五眼果体外对草酸钙晶体形成有抑制作用的有效组分是正丁醇部位和水溶性成分；五眼果正丁醇部位对H2O2氧化应激损伤HKC细胞保护作用最明显；五眼果正丁醇部位通过对尿液中草酸、钙离子、镁离子，尿液和血液中肌酐、尿素氮、P等水平的影响，减少肾脏中草酸钙结晶形成并减轻肾脏的损伤，其作用机制与肾脏OPN蛋白表达的降低有关。本项目从多层次、多角度评价五眼果抗草酸钙上尿路结石作用及其作用机制，为合理开发利用五眼果提供科学依据。