TLR4调节Treg/Th17细胞分化的机制以及对肝脏缺血再灌注损伤影响的研究

Ischemia-reperfusion injury, I/RI,is a complex pathological physiology process, the blocking blood flow and oxygen transportation decreases has lead to flammatory reaction and eventually cause organ damage.There are many factors Lead to liver I/R damage, but the exact pathogenesis is still unclear.This group of the experiment find that block the Toll like receptor 4 (TLR4) can reduce the liver I/RI,In addition, reinfusion in vitro-induced Treg can inhibit inflammatory cells factor IL-17 to reduce the liver I/RI.TLR4 and Treg,Th17 in ischemia-reperfusion whether any contact is still nuclear.This project through interpose TLR4 signal to analysis the TLR4 signal in vitro to the induction Treg and Th17 influence;And then analysis the influence of TLR4 in vivo to Treg/Th17 balance in the hepatic ischemia-reperfusion model.The success of this project to found a possible link between the innate immune and Secondary immune in the Ischemia-reperfusion injury,for clinical interventions to provide the theory basis.

肝脏缺血再灌注损伤（Ischemia-reperfusion injury, I/RI）是一个复杂的病理生理过程，血流的阻断及氧运输的减少导致炎症反应并最终引起器官损伤。导致肝脏I/R损伤的因素很多，确切的发病机制尚不十分清楚 。本组预实验中发现阻断Toll样受体4(Toll like receptor 4，TLR4)能够减轻肝脏I/RI，另外通过回输体外诱导的Treg能够抑制炎性细胞因子IL-17等来减轻肝脏I/RI。TLR4与Treg，Th17在缺血再灌注中是否有联系仍不清楚。本项目通过干预TLR4信号来分析在体外TLR4信号对诱导Treg和Th17产生的影响；再通过肝脏缺血再灌注模型分析TLR4在体内对Treg/Th17平衡的影响。本项目的成功有利于发现缺血再灌注损伤中先天免疫和继发免疫之间的可能联系，为临床采取干预措施提供理论依据。

Toll样受体（Toll-like receptors, TLR）是参与非特异性免疫（天然免疫）的一类重要蛋白质分子，也是连接非特异性免疫和特异性免疫的桥梁。人的TLRs受体可以分为5个亚科，即TLR2， TLR3， TLR4，TLR5和TLR9。TLR4可以识别革兰氏阴性菌脂多糖(LPS)，还可识别宿主坏死细胞释放的热休克蛋白(heat-shockproteins，HSP)，体内类肝素硫酸盐和透明质酸盐降解的多糖部分以及局部的内源性酶的级联活化反应也可激活TLR4。TLR4导致调节性T细胞和辅助T细胞17的失衡。研究证实TLR4是引起肝脏缺血再灌注损伤的重要因子。我们的研究主要针对1) TLR4信号对体外TGF-β诱导Treg的影响2) TLR4信号对体外诱导Th17的影响3) TLR4信号对肝脏缺血再灌注后小鼠肝内和外周血中Treg/Th17平衡的影响。项目开展以来，我们的课题组1. 成功建立相对稳定的小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型2. 利用CD25单克隆抗体PC61，完成了小鼠体内Treg的部分消除3. 完成了小鼠脾脏nTreg细胞的分选提纯并体外诱导Treg细胞及Th17细胞4. 发现MicroRNA-146a参与调节TLR4通路，并且有明确的肝脏保护作用。在此基础上，我们拟用TLR4基因敲除鼠及肝细胞TLR4干扰的体外模型，研究TLR4在I/R中对Treg/Th17的平衡的调节作用，为临床上减轻肝切除及肝移植术导致的缺血再灌注损伤提供新的思路及理论依据。