TLR4促进Treg细胞对肝脏缺血再灌注损伤的免疫抑制功能

我们已证明toll样受体4（TLR4）通过活化多种免疫细胞促进肝脏缺血再灌注损伤（IRI），但阻断TLR4不能完全缓解IRI；调节性T细胞（Treg）表面TLR4激活后，免疫抑制功能增强；且Treg参与IRI，故我们推测TLR4促进Treg抑制肝IRI免疫反应。本研究比对TLR4基因野生或缺失小鼠肝脏IRI模型中Treg浸润及肝脏损伤差异；进而①向T、B细胞缺陷仅有固有免疫的RAG-1KO小鼠移植不同TLR4基因型Treg、②用无Treg的小鼠T细胞与不同TLR4基因型Treg联合重建RAG-1KO小鼠T细胞，复制肝脏IRI，从固有及T细胞免疫两个方面分析TLR4对Treg抑制功能的影响；并离体将CD4+效应T细胞、KC、PMN细胞与TLR4野生或缺失Treg共培养，从细胞及在体两层次，探索TLR4促进Treg抑制肝脏IRI免疫反应的机制，为临床IRI防治、免疫生物治疗决策等提供理论依据。

我们已证明toll 样受体4（TLR4）通过活化多种免疫细胞促进肝脏缺血再灌注损伤（IRI），但阻断TLR4 不能完全缓解IRI；调节性T 细胞（Treg）表面TLR4 激活后，免疫抑制功能增强；且Treg 参与IRI，故我们推测TLR4 促进Treg 抑制肝IRI 免疫反应。本研究比对TLR4 基因野生或缺失小鼠肝脏IRI 模型中Treg 浸润及肝脏损伤差异；进而采用Cre-LoxP重组酶系统以FoxP3-Cre小鼠和TLR4-Flox小鼠为对象（两者均为C57BL/6遗传背景），培育出Foxp3特异性TLR4基因敲除小鼠，然后复制肝脏IRI，评估肝脏功能损伤，并运用流式细胞术检测肝脏CD11c、CD11b、F4/80、NK1.1、CD45、CD3等不同组合细胞的表达或活化变化，从固有及T细胞免疫两个方面分析TLR4 对Treg 抑制功能的影响；探索TLR4 促进Treg 抑制肝脏IRI免疫反应的机制，为临床IRI 防治、免疫生物治疗决策等提供理论依据。另外我们对TLR4是否影响骨髓来源干细胞对肝脏IR影响进行了探索性研究，提示TLR4敲除可以促进干细胞对肝脏IR的保护功能。因此到目前为止我们最主要的成果是成功培育出调节性T细胞特异性TLR4敲除小鼠，目前仅仅我们实验室有这个品系的小鼠，下一步我们一方面继续在短期完成我们课题的研究，另外我们将打算把这个品系的小鼠广泛用于TLR4对调节性T细胞免疫调节功能的研究上。