hTERT基因转染骨髓间充质干细胞促进小体积移植肝再生及其机制的研究

部分肝移植是缓解供肝缺乏的重要手段，而供肝与受体间体积重量不匹配将造成小体积综合征，引起移植肝再生障碍，并可导致移植物失功。骨髓间充质干细胞(MSC)能提高肝细胞增殖能力，改善增生环境，从而促进肝再生。端粒酶催化亚基(TERT)在维持干细胞寿命中作用重要，构建hTERT基因转染的MSC有望进一步提高小体积移植肝再生。建立30%大鼠部分肝移植模型，以性别交叉移植方式将MSC或hTERT转染MSC输入肝移植大鼠体内，利用Y染色体特异Sry基因和转染质粒pEGFP-N1携带的绿色荧光蛋白报告基因，观察其在移植肝内分布、归巢和分化；检测NF-κB、AP-1、p-c-Jun、CyD1、VEGF等水平变化，研究其调控肝细胞增殖的信号途径；观察IL-10、IP-10、CXCR2、Bcl-2等表达差异，探讨其通过旁分泌功能改善增生环境的可能。为hTERT转染MSC促进小体积移植肝再生提供理论依据。

部分肝移植是缓解供肝缺乏的重要手段，而供肝与受体间体积重量不匹配将造成小体积综合征，引起移植肝再生障碍，并可导致移植物失功。骨髓间充质干细胞(MSC)能提高肝细胞增殖能力，改善增生环境，从而促进肝再生。端粒酶催化亚基(TERT)在维持干细胞寿命中作用重要，构建hTERT 基因转染的MSC有望进一步提高小体积移植肝再生能力。. 体外分离培养并鉴定MSC，PCR扩增hTERT基因，结合鉴定结果成功构建含hTERT基因的重组慢病毒载体。包装病毒并获取高滴度病毒上清液，感染293T细胞后通过Western blot法检测hTERT基因获得阳性表达结果。将重组慢病毒液和空病毒液感染MSC，体外培养扩增，通过PCR和Western blot对目的基因表达检测，分析细胞周期发现hTERT-MSC细胞增殖潜力较MSC明显增加，检测其细胞标志物表达，鉴定成骨成脂分化能力和成肝诱导能力，裸鼠致瘤实验证明hTERT-MSC安全无致瘤性，且hTERT-MSC传代扩增多代，未出现类似MSC细胞老化现象。. 建立大鼠全肝移植和部分肝移植模型，研究发现小体积肝移植肝脏组织损伤严重，肝细胞再生能力受到明显抑制，且抗凋亡、抗炎症和生长相关基因表达下调，炎症相关基因表达上调，转录因子AP-1和NF-κB表达下降。小体积移植肝再生能力的抑制与肝细胞微环境的恶化和叠加的缺血再灌注损伤相关。小体积肝移植术后通过肝下下腔静脉输注MSC或hTERT-MSC，研究表明输注hTERT-MSC可显著提高肝移植大鼠存活率，增加移植肝重量，且移植肝显微结构改善明显，移植肝再生能力提高，且抗凋亡、抗炎症和生长相关基因表达上调，炎症相关基因表达下调。肝移植术后一周内能在荧光显微镜下观察到移植肝内归巢定植的hTERT-MSC细胞。至术后三周能够在移植肝中发现AFP的表达。. 实验结果表明hTERT基因转染的MSC能够促进小体积移植肝再生，其主要机制在于调控移植肝再生的信号传导途径，并通过旁分泌功能来改善组织增生环境。而至小体积肝移植术后晚期hTERT-MSC能够分化为类肝样细胞。我们的实验研究将为拓展劈离式肝移植和活体部分肝移植的临床应用提供前期的理论依据。目前部分相关研究结果已发表为多篇SCI论文和国内核心期刊论文。