HOXA10表达调控在急性髓细胞白血病发病机制中作用的实验研究

HOXA10基因在造血发育过程中具有双重调节作用, HOXA10基因过表达阻止髓细胞的分化最终导致急性髓细胞白血病，研究表明MLL对HOX基因表达有正向调节作用，但其关键的表达调控机制尚不清楚。前期的研究发现在AML细胞株中，E2介导的ERβ活化可导致HOXA10表达上调，通过分析还发现MLLs有核受体（NR）盒，主要参与E2依赖的雌激素受体的相互作用。我们推测MLL介导的HOXA10的H3K4甲基化可导致HOXA10启动子CpG岛低甲基化，从而调控其表达，ER可能在招募MLL结合到HOXA10启动子区的过程中起关键作用。本项目拟采用ChIP、RNAi、组蛋白和DNA甲基化检测等技术，研究E2依赖ER活化对MLL的招募作用，阐明MLL特异性调控HOXA10表达的途径和机制，探讨HOXA10调控作为AML防治新靶点的可能性。本研究对揭示AML的关键发病机制，寻找防治AML新策略有重要意义。

通过研究在急性髓性白血病细胞中HOXA10表达调控机制,探讨HOXA10调控作为AML防治新靶点的可能性。方法 以不同剂量雌二醇（E2）在不同时间点刺激急性粒细胞白血病细胞株（HL-60），以不刺激的HL-60细胞作参照应用RT-PCR检测HOXA10基因表达活性的差异明确E2对HOXA10表达的活化作用, 并在E2刺激下以反义寡核苷酸转染技术分别敲除ERα ，ERβ和 MLLs(MLL1-4)后再检测HOXA10 mRNA和蛋白表达的变化确定哪一种雌激素受体的活化与HOXA10的表达相关， 哪一种MLL对HOXA10表达有调控作用。以ChIP 实验检测MLL 和HOXA10 的相互作用，再以Western-blot 检测E2刺激前后组蛋白H3K4甲基化状态以明确MLL是否通过表观遗传学途径调控HOXA10的表达。结果 在E2 50nM 6h 刺激下HOXA10表达明显升高，ERα和ERβ反义寡核苷酸转染后HOXA10表达均有下降，MLL1表达沉默时HOXA10表达明显降低，MLL1可以结合到HOXA10启动子上的ERE区域而组蛋白H3K4甲基化状态在E2刺激后明显高于刺激前。结论 急性髓性白血病细胞的HOXA10基因表达受MLL1蛋白调控，可能为急性髓性白血病的致病机制分析提供了一个新的方向, MLL1介导的HOXA10表达的改变有可能成为急性髓性白血病的防治新靶点