道地通管汤对输卵管炎性模型家兔输卵管TGF-β1/Smads信号转导通路分子作用及体内荧光成像的研究

Infertility is the common disease in clinical, the factor of tubal infertility is the main cause of infertility. The Combined treatment of Chinese and Western Medicine make an individual advantage for infertility in clinic. Dao Di Tong Guan Decoction is a formula works by strengthening body resistance to dispel pathogenic factors ,and this therapeutic methods which applying together with clysis had a remarkable therapeutic effect on avoiding re-adhesion after laparoscopy and enhancing pregnancy rate ，it also can prevent ectopic pregnancy effectively. Previous studies show that Dao DI Tong Guan Decoction can improve blood viscosity of rabbit models and decrease plasma C-reactive protein concentration,IL-6 and the contents of PGF2α、PGE2 in tissue. It maybe exert the function by the effects of haemorheology and regulating inflammatory factor. On the base, this item adopts the method of mixed bacteria to made salpingitis model in rabbits, observation group with highs medium and low dosage Dao Di Tong Guan Decoction enema, to compared with Kang Fu Xiao Yan suppository ，and examined by RT-PCR, Fluorescent Labeling and immunohistochemistry ，to study the action of Dao Di Tong Guan Decoction in Role and Mechanisms of TGF-β_1/Smads Signal Transduction Pathway and In vivo fluorescent imaging , and find the relationships of interrelated inflammatory factors and elucidate the mechanism of Dao Di Tong Guan Decoction in treating oviduct flame. It will accumulate referential TCM study thinking for tubal infertility, anti-inflammatory and anti-adhesion, which is quite significant and has a wide application prospect.

不孕症是临床常见疾病，输卵管炎因素是引起不孕的主要原因。中西医结合治疗不孕在临床上有着独到的优势。以扶正祛邪大法组方而成的道地通管汤，在腹腔镜术后配合灌肠使用对预防术后再粘连、提高术后受孕率有明显的作用，且能有效防止宫外孕的发生。前期研究发现该汤能够改善模型家兔血液"粘、稠、滞"的状态，降低血浆C反应蛋白、IL-6及组织中前列腺素PGF2α、PGE2的含量，它可能是通过对血液流变学的影响和调节炎症因子发挥作用的。本项目拟在此基础上，采用混合菌法造家兔输卵管炎模型，以道地通管汤高、中、低剂量灌肠，康妇消炎栓为对照组，采用RT-PCR法检测、荧光蛋白标记法，研究该汤对转化生长因子β1（TGF-β1）/Smads信号转导通路分子的作用，及探索TGF-β1体内荧光成像图，深入探讨该汤治疗输卵管炎的作用机理，为输卵管炎性不孕及抗炎、抗粘连的中医药研究积累可借鉴的研究思维，具有重要学术意义和应用前景。

前期研究证明输卵管阻塞性不孕行腹腔镜术后配合道地通管汤灌肠治疗能预防术后盆腔粘连及输卵管再梗阻，提高术后受孕率；在使用道地通管汤干预输卵管炎性模型家兔的实验中，该汤可改善模型家兔血液“粘、稠、滞”的状态，在改善血液流变和调节炎症因子方面发挥一定作用，但其具体作用机制尚未明确。大量研究文献证明，TGF-β1/Smads信号通路参与了炎症和慢性纤维化过程，基于前期研究，我们提出“道地通管汤通过调节TGF-β1/Smads信号通路起到改善输卵管炎症作用”的假设，实验采用混合菌法建立炎性输卵管模型，采取qRT-PCR、蛋白印迹、免疫组化、扫描电镜等手段，观察炎性输卵管组织形态改变，及TGF-β1/Smads信号通路相关分子TGF-β1、TGF-βRⅡ、smad2、smad3、smad7蛋白和基因表达情况，探讨道地通管汤对输卵管炎的作用机理及对TGF-β1/Smads信号转导通路分子的影响作用，为临床治疗输卵管炎性疾病提供科学依据。..实验结果表明：.1、道地通管汤可减轻组织炎症细胞浸润及组织纤维化，改善与周围组织的粘连；改善其黏膜结构，增加纤毛数量，减少纤毛粘连，减少分泌细胞。.2、①与正常组比较，模型组、用药各组输卵管组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ、smad2、smad3表达增多（P<0.05），smad7表达则下降（P<0.05）。②与模型组比较，道地通管汤各组及康妇消炎栓组能不同程度降低TGF-β1、TGF-βRⅡ、smad2、smad3表达（P<0.05），增加smad7表达（P<0.05）。③与康妇消炎栓组比较，道地通管汤高剂量组smad2、smad3表达减少（P<0.05）。④给药30天时，道地通管汤高剂量组smad7蛋白表达高于低剂量（P<0.05）。.3、道地通管汤通过改善输卵管盆腔炎症，提高受孕率。..研究结论：.1、道地通管汤通过减轻组织炎症细胞浸润及组织纤维化、改善与周围组织的粘连、改善其黏膜结构、增加纤毛数量、减少纤毛粘连、减少分泌细胞，起到改善输卵管炎症反应的作用。.2、TGF-β1/Smads信号通路参与输卵管炎症发生与修复过程。.3、道地通管汤改善输卵管炎症的作用机理是通过下调TGF-β1、Smad2、Smad3表达，上调Smad7表达，抑制TGF-β1信号转导，阻碍其激活通路，从而阻断炎症发展。