Hsa-mir-126调控PKCdelta/ERK信号通路及其在系统性红斑狼疮发病机理中的作用

系统性红斑狼疮（SLE）发病机制尚不清楚，T细胞信号通路异常在SLE发病中起重要作用，研究发现SLE CD4+T细胞自身反应性与PKCdelta及下游ERK信号通路缺陷密切相关，但引起PKCdelta/ERK信号通路缺陷的深层次机理不清；miRNA通过调控基因表达在肿瘤及自身免疫疾病发病中起重要作用。我们前期研究发现has-mir-126表达在SLE患者CD4+ T细胞中异常增加，并且发现其可能调控PKCdelta/ERK信号通路的表达。为此我们提出异常高表达has-mir-126通过抑制PKCdelta/ERK信号通路，导致与自身免疫有关的基因在CD4+T细胞过度表达，使CD4+T细胞具有自身反应性，从而在SLE发生发展中起十分重要作用的全新假说，本研究通过验证has-mir-126调控PKCdelta/ERK信号通路,抑制其过表达逆转SLE CD4+T细胞自身反应性来证实这一全新假说。

系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus, SLE）是一种多器官、多系统受累，严重危害人类健康的自身免疫性疾病。本课题组先前的研究已证实DNA低甲基化导致T细胞异常活化在SLE发病中起重要作用。然而，目前导致SLE患者外周血T细胞病理性低甲基化的分子机制尚未完全阐明。本项目利用micorRNA表达谱芯片筛选SLE患者和正常人CD4+T细胞之间差异表达microRNAs，并且利用stem-loop RT-PCR方法证实miR-126在SLE患者CD4+T细胞中表达水平显著增高，而miR-142-3P在SLE患者CD4+T细胞中表达水平显著降低。我们通过生物信息学预测、荧光素酶报告基因检测证实DNMT1是miR-126的靶基因。此外，real-time PCR和western blot检测发现SLE患者CD4+T细胞中DNMT1蛋白表达水平与miR-126的转录水平呈显著负相关。由此，我们推测SLE患者CD4+T细胞中miR-126水平显著升高可能是导致T细胞中DNMT1表达水平降低，DNA低甲基化的重要机制之一。由此，我们在正常人CD4+T细胞中的过度表达miR-126，发现CD11a和CD70基因甲基化水平表达降低, 而CD11a和CD70蛋白及mRNA水平明显升高，T细胞自身反应性显著增加。相反，特异性抑制SLE病人CD4+T细胞中miR-126表达，发现CD11a和CD70基因甲基化水平升高,而CD11a和CD70蛋白及mRNA水平显著降低，且显著抑制T细胞自身反应性。此外，我们探讨了SLE患者CD4+T细胞中miR-126表达升高的分子机制。miR-126是一种内含子microRNA，其宿主基因为EGFL7。Real-time PCR检测结果显示SLE患者CD4+T细胞中miR-126转录与EGFL7基因转录成正相关。进一步亚硫酸盐测序检测我们发现SLE患者CD4+T细胞中EGFL7基因启动子区甲基化水平较正常对照显著降低。由此可见，DNA低甲基化诱导SLE患者CD4+T细胞miR-126表达水平升高。以上研究揭示miR-126表达水平升高是导致SLE患者CD4+T细胞基因低甲基化、异常活化及自身反应性的重要机制之一。该研究结果表明miR-126可能是SLE治疗的有效新靶点。