B细胞CD40分子跨膜穿梭转运中支架蛋白JIP的作用及其人工调控回路的构建

CD40分子触发的信号效应，在塑造B细胞免疫应答中起关键作用。CD40分子在胞浆胞膜间的穿梭转运，是B细胞CD40膜密度快速调升调降的主要途径；胞膜CD40分子异常滞留导致B细胞CD40信号持续活化，是多种自身免疫性疾病的重要发病原因。B细胞内CD40分子跨膜穿梭转运的生理分子机制目前仍不清楚。基于前期研究结果，本课题首先提出B细胞CD40分子跨膜穿梭转运的分子模型，拟通过实验鉴定B细胞中介导CD40分子囊泡转运的支架蛋白JIP分子；解析囊泡转运中相关核心分子（马达蛋白、JIP、ARF6、Rab4,5）的相互作用，及其调节CD40囊泡运输方向（出胞与入胞）的分子机制；进一步构建基于JIP突变体的CD40转运人工调控回路，创立B细胞CD40胞浆滞留模式，实现对B细胞CD40信号的淬灭效应。希望从免疫受体CD40囊泡转运的深度解析B细胞功能动态调控机制，并探索重建B细胞免疫耐受的新治疗策略。

CD40 是体液免疫和细胞免疫中的关键调控者，CD40 信号通路在B 细胞生理功能中发挥重要作用。B 细胞膜表面CD40 分子表达水平是影响其免疫调控效应的重要机制。膜表面CD40 在与其配体CD40L 结合后可以囊泡形式内化入胞，在胞浆中滞留一段时候后重新回到胞膜表面，CD40 的这种穿梭跨膜转运是调节其表面表达水平的基本途径，但具体机制尚不清楚。本研究探讨支架蛋白JLP在调控B 细胞CD40 囊泡转运中的作用及分子机制，并验证基于JLP 的新型人工调控回路在CD40 囊泡转运中的作用。通过建立JLP 基因缺陷小鼠及体外B细胞JLP 基因敲除，观察B 细胞表型变化、CD40 信号通路改变、CD40 分子囊泡转运机制，初步揭示了支架蛋白JLP 分子在B 细胞CD40 分子信号传递及囊泡转运中的重要作用。在此基础上，构建几种基于JLP 分子的人工回路，将它们导入B 细胞后，发现可人工调控相关分子的转运。从而影响B 细胞对外界信号的反馈模式，为通过人工调控回种纠正B 细胞活性或功能异常提供了前期研究基础。本项目基本按计划完成。