食品中糖肽类抗生素残留的选择性富集及检测方法研究

Food safety problems caused by antibiotics as animal feed additives have been the focus of attention. Vancomycin, as a representative of glycopeptide antibiotics (GAs), has been banned as illegal additive by many countries. However, the detection methods of GAs are not yet satisfied. Glycopeptide antibiotics are complex and analogue, so the extraction andseparationfrom complex food sample matrix is one of the problems of high-sensitive GAs detection. This proposal addresses these problems, including selective enrichment, chromatographic optimization and mass spectrometry analysis. In the sample pre-treatment aspect, the specific enrichment materials will be selected and experimental conditions will be optimized according to the matrix complexity and GAs structural features. Both QuEChERS and solid phase extraction (SPE) approaches are combined to reduce matrix interference and increase the recovery rate. In high sensitive detection aspect, liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS) method is used to improve the separation selectivity and sensitivity ofthe GAs. In the identification of GAs analogues aspect, the structures are speculated by MS fragmentation.

抗生素作为饲料添加剂所引发的食品安全问题一直是人们所关注的热点，以万古霉素为代表的糖肽类抗生素已经被多个国家列为禁用添加剂，但目前其相应的检测方法研究还不成熟。糖肽类抗生素结构复杂、类似物多，如何从复杂的食品样品基质中提取并进行高灵敏度检测是兽药残留预防检测的难点之一。本项目针对上述难点问题，开展包括高选择性样品前处理和色谱质谱联用分析检测的糖肽类抗生素残留检测方法研究。在样品前处理方面，根据基质复杂程度和糖肽类抗生素结构特点，选择特异性的富集材料并优化富集条件，采用QuEChERS与固相萃取（SPE）相结合的方式，降低基质干扰，提高回收率。在高灵敏检测方面，采用液质联用的方法，通过提高液相色谱的选择性和优化质谱条件，改善糖肽类抗生素的分离选择性，提高检测灵敏度。在结构类似物鉴定方面，通过对解析已知样品的裂解规律总结，鉴定糖肽类抗生素未知类似物。

糖肽类抗生素是人类对抗严重感染时用的重要抗生素，但其常被用来做兽药使用而引起在食品中的残留，继而引发耐药性等问题危害人类健康。基于此，发展高选择性前处理方法及高灵敏度的检测方法对于该类物质非法添加的监管是非常必要的。糖肽类抗生素结构较为独特，既有亲水基团又含有疏水基团的，是既具有碱性基团又具有酸性基团的两性分子，这些特点都给其高灵敏度检测带来一定困难。本项目针对该类化合物检测的难点问题提出一些解决方案。首先针对反相色谱分离峰形差，质谱兼容性差等问题，筛选出混合模式材料XCharge C18色谱固定相发展新的反相分离方法，该方法具有流动相简单，峰形好，检测灵敏度高及质谱兼容性好等诸多优点；首次将亲水作用色谱方法引入到万古霉素类抗生素的分离中，通过调节流动相条件探讨了该类型化合物的亲水保留规律，并给出优化的万古霉素及其主要杂质的分离条件，将发展的亲水作用色谱方法应用于其他类型的糖肽类抗生素中解决了其分离选择性问题。在所建立的分离方法基础上，开始糖肽类抗生素的富集方法研究，在研究中对前处理材料进行了筛选和优化，所使用的材料包括离子交换材料、反相材料、离子交换和反相混合模式材料等。项目执行中还通过变换前处理方法如采用QuEChERS方法和SPE方法来应对不同复杂程度的基质，发展了蜂蜜和牛奶样品的检测方法，并对4种品牌蜂蜜实际样品进行了检测，未检出该类型化合物。项目中还对万古霉素结构类似物进行多级质谱碎裂，但由于标准品纯度不高，以及同分异构体碎片结构相同而未能实现对质谱规律的总结。