沉默FAK基因对口腔癌相关成纤维细胞分化及其促癌作用的影响

肿瘤微环境在肿瘤的发生发展中具有重要作用，而癌相关成纤维细胞（CAFs）是肿瘤微环境中的重要成分，可促进肿瘤的生长、侵袭及转移。口腔癌相关成纤维细胞的分化机制及促癌作用机理尚不清楚，本课题组在前期研究的基础上提出其可能与"整合素/TGF-β1-FAK"信号通道有关，而FAK处于信号通道的关键点，沉默FAK基因表达有可能抑制CAFs的分化及促癌作用。本研究在建立口腔癌CAFs分化的细胞模型及口腔癌裸鼠移植瘤模型的基础上，通过构建针对FAK基因的壳聚糖/siRNA纳米颗粒，并与CAFs特异性的FAP抗体结合，在体外、体内实验中靶向沉默CAFs中的FAK基因，阻断整合素/TGF-β1-FAK信号通道，检测其对CAFs分化及对移植瘤生长、侵袭与转移的影响，以期初步阐明CAFs的分化机制及其促癌作用的机理，并为通过改变肿瘤微环境进行口腔癌防治提供研究基础。

本研究基本按照原定计划完成相关研究。通过本研究发现并证实了癌相关成纤维细胞这一特殊类型细胞在口腔鳞状细胞癌周围的肿瘤微环境中广泛存在，并通过Fujii分级方法进行了CAFs的分级评估。同时研究发现在不同临床分期、病理分级、TNM分期的口腔鳞癌组织中CAFs分级具有显著性差异，说明CAFs可能与肿瘤的临床分期、病理分级及预后有关。本研究成功分离培养出了原代口腔鳞癌癌相关成纤维细胞和正常口腔黏膜成纤维细胞（NFs），建立了CAFs体外细胞模型，体外实验证实口腔鳞癌组织中CAFs的增殖、粘附及迁移能力均高于NFs，并发现了CAFs特异性的高表达FAK基因，且与α-SMA表达具有显著正相关性。进一步研究发现CAFs的条件培养液能够诱导口腔癌细胞SCC-25的侵袭和迁移。而通过siRNA干扰特异性沉默CAFs中FAK基因的表达，可以抑制CAFs条件培养液对SCC-25侵袭和迁移的诱导作用，而这种抑制作用是通过下调FAK下游基因单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1/CCL2）的表达实现的。而通过沉默趋化因子受体2（CCR2）阻断MCP-1与CCR2之间的相互作用，可以消除CAF条件培养液对肿瘤细胞侵袭和迁移的介导作用，但对于已沉默FAK基因的CAF（CAFKD）的条件培养液则无此作用。因此FAK基因可能通过MCP-1/CCL2信号通道来调控CAFs的活化状态，从而通过改变肿瘤微环境来促进口腔癌细胞的侵袭、转移。因此通过靶向沉默CAFs中的FAK基因改变肿瘤微环境有可能降低口腔癌患者的复发率和转移率，改善其预后，产生较大的经济和社会效益，从而有可能成为未来口腔鳞癌治疗策略的新方向。