用固本泻浊方经结肠透析干预 “肠-肾轴”改善尿毒症肠道微生态及肠上皮屏障炎症性损伤的作用和机制研究

In ESRD patients，Gut-kidney Axis impaired，intestinal flora imbalance and increased intestinal toxin lead to intestinal epithelial inflammatory injury. According to the important role of Keap1-Nrf2 imbalance induced by oxidative stress and the signal transduction of Nrf2/NF- kappa B in intestinal epithelial barrier injury and systemic inflammation, and the related theoretical basis of Chinese medicine, we take the "spleen and kidney deficiency, stomach disharmony, dampness stasis intrinsic" as the key pathogenesis of intestinal inflammation in CKD, suggest that the use of Guben Xiezhuo prescription through colon dialysis can improve intestinal flora disorder, regulate the Nrf2/ROS/NF- kappa B signal transduction mediated by urinary toxin, alleviate the oxidative stress inflammatory response and intestinal epithelial barrier injury，reduce systemic inflammatory. From the perspective of " Gut-kidney Axis ", the main content of the study is to regulate the signal transduction of Nrf2/NF- kappa B.We will observe the underlying mechanism of intervention in the intestinal oxidative stress response during uremia after the use of Guben Xiezhuo prescription through colon dialysis, and then provide a new scientific basis for the treatment on" Gut-kidney Axis " dysfunction.

尿毒症时期“肠-肾轴”功能受损，肠道微生态改变、毒素分解增加，导致肠上皮粘膜炎性损伤和系统性炎症。根据氧化应激诱导Keap1-Nrf2失衡及Nrf2/NF-κB细胞信号转导在肠上皮屏障损伤及系统性炎症中的重要作用及相关的中医理论基础，以“肠-肾轴”理论为切入点，把握“脾肾亏虚，胃失和降，湿浊瘀血内蕴”为慢性肾脏病肠源性炎症的病机关键，提出“使用固本泻浊方经结肠透析给药可以改善尿毒症内环境下的肠道菌群移位及对毒素的分解，通过调控尿毒素介导的Nrf2/ROS/NF-κB信号转导，减轻肠道氧化应激炎症反应及肠上皮屏障损伤，进而减轻肠源性的系统性炎症反应”这一假说，从“肠-肾轴”这一视角，以调控Nrf2/NF-κB信号转导为研究主体，观察固本泻浊方经结肠透析给药干预尿毒症时期肠源性氧化应激反应的深层作用机制，为用固本泻浊方经结肠给药治疗“肠-肾轴”功能紊乱提供新的科学依据。

尿毒症时期肠道微生态改变、肠源性毒素生成增多，肠上皮粘膜发生损伤，体内存在系统性炎症，此机理符合中西医“肠-肾轴”理论。中药结肠透析临床治疗效果显著，肠道菌群及肠上皮屏障可能是其发挥作用的重要靶点。基于此科学问题，本课题组第一部分研究分离纯化出肠道细菌的肌酐酶，推定出氨基酸序列。观察到肾衰竭时期肠道细菌肌酐酶表达增加、分解肌酐能力增强，固本泻浊方结肠透析可以下调肌酐酶的表达，减轻肠道细菌对肌酐的分解，由此改善系统性炎症。第二部分研究采用5/6 肾切除法构建肾衰大鼠模型，运用固本泻浊方结肠透析干预，结果提示对照组大鼠肾脏炎症浸润、凋亡坏死等更加明显，炎症因子表达显著升高，固本泻浊方结肠透析可改善肾脏损伤、降低炎症因子。此外，固本泻浊方结肠透析还可以调节尿毒症大鼠肠道菌群紊乱。第三部分研究采样离体人结肠上皮细胞（T84）培养，建立尿毒素刺激诱导的肠屏障损伤模型，通过固本泻浊方干预，结果发现尿毒素具有破坏肠道屏障的能力， 与Keap1-Nrf2 失衡及 Nrf2/NF-κB激活相关， ELISA分析结果表明，肠屏障损伤后进一步诱发炎症因子上升，而固本泻浊方结肠透析可以影响上述信号通路、减轻微炎症及肠上皮损伤。.这些研究成果证实了固本泻浊方法经结肠给药可以改善慢性肾脏病内环境下的肠道菌群移位及对毒素的分解，通过调控尿毒素介导的Nrf2/ROS/NF-κB信号转导，减轻肠道氧化应激炎症反应及肠上皮屏障损伤，进而减轻慢性肾脏病肠源性的全身系统性炎症反应，为用固本泻浊方经结肠给药治疗慢性肾衰竭提供夯实的科学依据。此外，基于“肠-肾轴”我们还拓展了相关研究，证实了“肠-肾轴”功能紊乱参与了IgA肾病的致病，调节肠道菌群可影响肾小管上皮细胞自噬水平，临床运用固本泻浊方结肠透析治疗还能取得更多疗效。系列研究成果获得上海市中西医结合科学技术奖三等奖、共发表11篇论文。总之，固本泻浊方结肠透析治疗能有效干预“肠-肾轴”紊乱，具有明确的作用机制和靶点，在临床中治疗慢性肾脏病具有重要价值。