整合素β3在日本脑炎病毒进入血管内皮细胞过程中的作用研究

Japanese Encephalitis is an acute Zoonotic disease caused by the Japanese encephalitis virus (JEV). Pigs are considered to be the most important natural proliferation animals and main source on JEV infection.Vascular endothelial cells are important target cells to proliferate in vivo and break through the blood-brain barrier forJEV. It was important significance to find out JEV receptors in the development of more effective vaccines and antiviral drugs and revealing the molecular mechanisms of JEV infection and immune.On the basis of the preliminary studies,pig hips artery endothelial cells（PIEC）was used to analysis the integrin expression and the PI3K/Akt signaling pathway after JEV infection by flow cytometry, Western blot and Q-PCR,and the interaction between integrin and JEV envelope protein was detected by RNAi, bimolecular fluorescence complementation test and laser confocal technical analysis,then key areas and key sites of the interaction were determined by co-immunoprecipitation technology, point mutation and reverse genetic techniques.The purpose of this study was to analyze the role of integrin β3 dur ing JEV entry into PIEC,in order to reveal the mechanism of JEV entry into the cellular and the mechanism of breaking through the blood-brain barrier.They would provide a theoretical basis for novel prevention and treatment for JEV.

日本脑炎是由日本脑炎病毒（JEV）引起的一种人兽共患的急性传染病。猪被认为是JEV最重要的自然增殖动物和主要传染源。血管内皮细胞是JEV在机体内增殖和突破血脑屏障的重要靶细胞。研究JEV受体对于揭示JEV感染与免疫的分子机制，研制更有效的疫苗和抗病毒药物等都有重要的意义。本项目在前期研究的基础上，以猪髋动脉内皮细胞（PIEC）为研究对象，拟采用流式细胞术、免疫印迹技术和Q-PCR分析JEV感染对PIEC 中整合素表达及其PI3K/Akt信号通路的影响，并通过RNAi、双分子荧光互补试验和激光共聚焦技术分析整合素与JEV囊膜蛋白E相互作用，然后利用免疫共沉淀技术、点突变技术和反向遗传技术确定两者结合的关键区域和关键位点。本研究旨在分析整合素β3在JEV感染PIEC过程中的作用，以期能揭示JEV的入胞机制，阐明JEV突破血脑屏障的机制，为今后探索对本病的新型预防与治疗措施提供理论基础。

流行性乙型脑炎（Epidemic Encephalitis B），是由日本脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus , JEV) 引起的以中枢神经系统损害为主的急性传染病。猪被认为是JEV最重要的自然增殖动物和主要传染源。病毒与细胞表面相应受体的结合是病毒生命周期中的始动环节，也是影响病毒宿主范围、组织嗜性和致病性的决定因素之一。病毒入胞于是也成为当前抗病毒治疗和抗病毒药物设计一个具有吸引力的靶点。本研究旨在分析整合素β3在JEV感染PIEC过程中的作用，以期能揭示JEV的入胞机制，阐明JEV突破血脑屏障的机制。本研究成功表达了日本脑炎病毒E蛋白受体结合域及其突变体，并制备了其多克隆抗体；建立了JEV弱毒疫苗株反向遗传技术平台；证实了整合素β3是 JEV感染PIEC细胞的必需受体；解析了囊膜蛋白结构域Ⅲ及其保守的RGD基序在介导JEV入胞过程中作用；BIFC试验结果也进一步证实整合素β3与E蛋白能直接结合而发生互作，推测整合素β3是介导JEV入胞过程中的受体。本研究发表学术论文7篇，其中SCI论文2篇，培养研究生2名。本研究为进一步揭示JEV的入胞机制和阐明JEV突破血脑屏障的机制奠定了基础，并对今后探索本病的新型预防与治疗措施提供理论依据。