肝脏移植后急性移植物抗宿主病中CD4+CD25+调节性T细胞的来源及功能研究

Acute graft-versus-host disease (aGVHD) is a serious and life-threatening complication of liver transplantation (LT) and is associated with a high mortality rate (80-100%). LTx-aGVHD poses major diagnostic and therapeutic challenges due to lack knowledge of its immunological mechanism. The applicant of project had participated in diagnosing and treating five LTx-aGVHD patients and have some knowledge of this disease. The applicant and team members have been doing related research recently and made some achievement, including establishment of LTx-aGVHD animal model, finding the change of CD4+CD25+ regulatory T cells in the disease, and comparing effect of different immunosuppressants. However, the source, distribution and function of CD4+CD25+ regulatory T cells are still unclear. This project is going to figure out these problems and related immunological mechanism. These results are hopeful to clarify pathogenesis and provide new treatment plan to the clinic.

目前肝脏移植后急性移植物抗宿主病（LTx-aGVHD）是一个世界性难题，治疗效果差，死亡率高达80-100%，其中最主要的原因是对本病的相关免疫学机制认识不清。课题申请人在临床工作中曾参与5例LTx-aGVHD患者的诊断和治疗，对本病的临床发病特点和病程转归有客观认识，至今一直进行相关的基础研究。研究结果包括：在国际上首次建立了动物LTx-aGVHD模型；发现了CD4+CD25+调节性T细胞在其中的变化规律；比较研究了不同免疫抑制剂通过作用于CD4+CD25+调节性T细胞对降低该病高死亡率的疗效。但我们仍不清楚此时受体内发挥作用的CD4+CD25+调节性T细胞来源、分布以及功能等免疫学问题。本研究拟在既往研究的基础上，应用我们具有原创性的动物模型平台，应用磁珠分选、流式细胞技术、免疫组化等方法研究上述免疫学问题。研究结果将为进一步阐明该病的发病机制和临床治疗提供新的理论基础和转化医学证据。

急性移植物抗宿主疾病（ LTx-aGVDH）是一种肝脏移植后严重的并发症，其发病率低，但是死亡率极高，并且缺乏有效的治疗手段。在前期研究中我们已经成功建立大鼠LTx-aGVHD模型，并发现其发病和进展与受体内CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）的下降相关。通过本项目我们回答了曲古抑菌素A （TSA）治疗LTx-aGVHD失败的机制问题；同时研究了供/受体来源Treg在LTx-aGVHD发生、发展中的变化和作用；并以Treg为靶点验证雷帕霉素（RAPA）和OSI-027对LTx-aGVHD的治疗作用和机制。（1）既往研究认为TSA可以刺激胸腺细胞产生Treg，并促进外周系统中的效应性T细胞向Treg转变，已被用于治疗骨髓移植后的aGVHD。但本研究发现尽管TSA能够轻度上调LTx-aGVHD受体大鼠外周血中Treg的比例，但却降低了Foxp3的表达，最终使Treg减少，对LTx-aGVDH无明显治疗作用。（2）以GFP transgenic Lewis大鼠为供体，（普通Lewis×BN）F1大鼠为受体，建立LTx-aGVHD模型，检测受体中不同来源Treg的分布和变化。（3）OSI-027与RAPA都能够增加受体大鼠中Treg的比例，而OSI-027 的效果明显优于RAPA。RAPA能够抑制mTOR1复合体的活性，但对mTOR2 复合体的作用较弱；OSI-027 能够同时有效抑制mTOR1/mTOR2复合体，更利于CD4+CD25-T细胞向Treg转化，获得更有效的治疗作用。（4）将体外分离培养获得的Treg回输给LTx-aGVHD模型大鼠，其能够有效防止aGVHD 发生。本研究结果使我们对该病的免疫学发病机制有了更深入的认识，并可望为以Treg为靶点筛选出有效的治疗LTx-aGVHD新方案提供科学依据。