产单一性别后代奶牛对XY精子差异选择的分子机制研究

在生产中存在奶牛终生产单一性别后代的现象，从分子水平揭示这一现象的发生机理，对完善哺乳动物性别控制有非常重大的理论意义，为奶牛等繁殖率低且限性性状生产家畜的性别控制技术研究提供新线索。本项目以终生产母犊和终生产公犊的奶牛为研究对象，采用超数排卵、活体采卵、子宫分泌物精子体外抑制、卵母细胞体外受精及流式细胞分析、PCR技术检测，确定其子宫分泌物和卵母细胞对XY精子的选择性；进而利用二维电泳，分析两类型奶牛子宫分泌物和卵母细胞对XY精子选择的差异蛋白；采用固相支持物磁珠扣除杂交和Super SMART技术，构建两种类型奶牛卵母细胞差异表达基因的cDNA库，利用生物信息学检测分析特异表达基因，证明终生产母犊和终生产公犊奶牛的子宫分泌物和卵母细胞对XY精子存在选择差异，发现两种类型奶牛子宫分泌物、卵母细胞差异蛋白和差异表达基因。

本项目主要研究对象是终生产母犊和终生产公犊的奶牛，采用超数排卵、子宫分泌物精子体外抑制、卵母细胞体外受精及流式细胞分析、PCR技术检测，确定其子宫分泌物和卵母细胞对XY精子的选择性；利用二维电泳技术，分析了两类型奶牛子宫分泌物和卵母细胞对XY精子选择的差异蛋白；采用固相支持物磁珠扣除杂交和Super SMART技术，构建两种类型奶牛卵母细胞差异表达基因的cDNA库，利用生物信息学检测分析特异表达基因，证明了终生产母犊和终生产公犊奶牛的子宫分泌物和卵母细胞对XY精子存在选择差异，发现两种类型奶牛子宫分泌物、卵母细胞差异蛋白和差异表达基因。.　　已获得研究成果：⑴确定产单一性别后代奶牛生殖激素的特征；建立一种基于扣除杂交筛选差异表达基因的方法；⑵建立奶牛宫颈粘液相关ASA免疫印迹分析方法，建立Sry基因探针FISH检测奶牛XY精子纯度和F小体检测奶牛XY精子纯度的方法; ⑶开展奶牛宫颈粘液对XY精子的选择性差异实验，并确证终生产母犊和终生产公犊的奶牛子宫分泌物对XY精子的选择性存在;⑷建立了一种有效分离奶牛宫颈粘液的SDS-PAGE方法，Western blot试验结果显示不孕奶牛宫颈粘液ASA能够识别更多的精子膜抗原;⑸发表论文11篇；⑹申请专利2项，1项已授权，1项审批中。. 项目从分子水平初步揭示奶牛终生产单一性别后代的现象的发生机理，对完善哺乳动物性别控制有非常重大的理论意义，为奶牛等繁殖率低且限性性状生产家畜的性别控制技术研究提供新线索。