基于内质网应激的活络效灵丹异病同治生物学基础研究

冠心病和糖尿病的高致死率和高致残率，严重威胁了人类生存和生活质量，成为公共健康的首要问题。新近研究发现，由代谢性炎症导致的内质网应激（ERS）是2者发病的共同病理机制。本项目以活络效灵丹为研究工具，以ERS导致的细胞生存和细胞凋亡为研究背景，以发病的实验动物及血管内皮细胞为研究对象，紧密结合中医治则治法中的异病同治理论，通过现代生物学技术，从整体、细胞及基因调控水平多层次、多环节展开对中医药防治冠心病和糖尿病过程中血管病变的作用机制研究，以阻断血管病变发生发展途径，逆转其病理过程，寻求中医药防治血管病变的共同性与特异性规律，初步解析活络效灵丹异病同治的生物学基础。为异病同治研究提供一种较为可行的研究思路；为中医治则治法的现代生物学基础研究开拓新途径。

本项目所选择的活络效灵丹对心血管疾病和糖尿病具有良好的防治作用。是临床常用的异病同治之代表方。本实验研究结果表明：活络效灵丹对2型糖尿病大鼠的血糖血脂有一定的改善作用，能在一定程度上降低大鼠的血糖水平，其中活络效灵丹中剂量在糖尿病大鼠血糖升高初期具有一定的降糖作用。STZ注射4周后，低中剂量可稳定降低血糖，并且效果优于高剂量组，但没有表现出明显的量效关系。这可能与中药复方的成分复杂，也可能与动物的个体差异有关。活络效灵丹对大鼠体重的影响为络效灵丹中剂量与STZ注射同时使用时，可至少延迟大鼠体重下降6周。本实验在胰岛素耐量试验中发现低剂量组未出现胰岛素抵抗现象，但未观察到活络效灵丹对胰岛素的分泌的影响，对糖尿病大鼠尿量有使其降低的趋势，这可能与其维持糖尿病大鼠体重有一定相关性。且高剂量组活络效灵丹可促进尿素的排出，肾脏病理切片表明活络效灵丹可缓解模型入球小动脉的过度扩张、近曲小管上皮细胞肥大。提示活络效灵丹可能在防治糖尿病肾病方面具有一定作用。在高剂量组显示出一定程度上降低TC,升高HDL的作用，说明活络效灵丹可能具有调节血脂水平的作用。活络效灵丹对糖尿病大鼠循环内皮细胞有不同程度的抑制作用。中药组血管内膜细胞排列较有序。这可能是其抑制循环内皮细胞产生的主要因素。本课题发现活络效灵丹可不同程度的使糖尿病大鼠血管GRP-78、XBP-1、Caspas-3、Caspas-9表达上调。这可能是其保护血管的主要因素之一。对于球囊拉伤的家兔模型活络效灵丹有改善微循环，,能有效地降低CHO、TG、LDL、APO-B ,清除氧自由基等作用。细胞实验发现在激光共聚焦检测时可见活络效灵丹低剂量和高剂量组绿色荧光表达较强于模型组和丹参酚酸B组，且形态完好，表明活络效灵丹可有效保护由凝血酶诱导的血管内皮细胞内质网的结构。通过流式细胞检测、免疫荧光检测及免疫组化检测发现活络效灵丹可有效提高GRP-78的表达。说明活络效灵丹对凝血酶诱导的血管内皮细胞内质网的结构的保护可能与GRP78表达上调有关。同时发现活络效灵丹也可使凝血酶诱导的血管内皮细胞Caspas-3 、Caspas-9的表达上升，但与模型组相比，P值＞0.05，无统计学意义，说明活络效灵丹对细胞凋亡通路影响不大。总之，作为异病同治的代表方，其可有效保护血管，可能与其上调GRP-78的表达。降低血糖、血脂有关。