基于Wnt/β-catenin信号通路研究活络效灵丹抗心肌缺血再灌注损伤的分子机制

Wnt signal pathway is a common highly conservative signal pathway in organisms. Previous studies have found that Wnt/beta catenin signal pathway is activated when myocardial ischemia and reperfusion injury(I/R) and myocardial infarction. Many signal pathway can regulate Wnt/beta catenin pathway and so wnt/beta catenin pathway is a common pathway of other signal pathways. Huoluo Xiaoling pellet is the classical prescription on tne treatment of myocardial ischemia. Our previous researches found that it has the prevention effect on experimental rat acute myocardial ischemia. It also can against myocardial cells hypoxia/reoxygenation injury and can regulate the expression of wnt/beta catenin pathway.But we don't know the wnt/beta catenin's specific targets affected by Huoluo Xiaoling pellet and also don't know the mechanism about Huoluo Xiaoling pellet's effect on I/R through Wnt/beta catenin signal pathway. So, this study will use molecular biology, immunohistochemistry, Pathological morphology, biochemistry, haemodynamics techniques to research the Wnt/beta catenin pathway's specific targets affected by Huoluo Xiaoling pellet and expound molecular mechanism of Huoluo Xiaoling pellet against I/R through Wnt/beta catenin pathway.

Wnt信号通路是生物体中普遍存在的高度保守的信号通路，有研究报道在心肌缺血再灌注损伤及心肌梗死时会引起Wnt/β-catenin通路的激活,很多信号通路都参与Wnt/β-catenin信号通路的调节，可以说Wnt/β-catenin通路是其他多条信号通路的一条共同通路。活络效灵丹是治疗心肌缺血的经典古方，我们前期研究发现其具有防治在体实验性大鼠急性心肌缺血的作用，在保护体外缺血再灌损伤心肌细胞的同时，可以调控Wnt/β-catenin通路的表达。但是，活络效灵丹作用于Wnt/β-catenin的具体靶点及其抗心肌缺血再灌注损伤的作用机制还不清楚，本研究将以分子生物学、免疫组织化学、病理形态学、生物化学、血流动力学等技术平台，研究活络效灵丹作用于Wnt/β-catenin通路的具体靶点，揭示活络效灵丹通过调节Wnt/β-catenin通路抗心肌缺血再灌注损伤的分子机制。

心肌缺血后，在恢复血流的过程中，又会造成新的损伤，即缺血再灌注损伤（I/R）。心肌缺血再灌注损伤时Wnt/β-catenin信号通路激活，抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活可以对抗心肌缺血再灌注损伤。我们对活络效灵丹进行新工艺制备及质量控制，复制心肌缺血再灌注损伤模型（在体模型、离体模型、体外细胞模型），以分子生物学、生物化学、病理形态学、血流动力学等为技术平台，检测血流动力学参数、血清酶、心肌梗死范围、心肌细胞超微结构、细胞凋亡，及信号通路研究活络效灵丹抗心肌I/R的作用及作用于Wnt/β-catenin信号通路的具体靶点，阐释其抗心肌I/R的分子机制。.主要研究内容：1.活络效灵丹样品的制备及质量控制。2.对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。3.对大鼠缺血再灌注损伤心肌Wnt/β-catenin通路的影响。4.Langendorff灌流观察对离体心脏缺血再灌注损伤的影响。5.Langendorff灌流观察对缺血再灌注离体心脏Wnt/β-catenin通路的影响。6.对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。6.对缺氧/复氧损伤心肌细胞Wnt/β-catenin通路的影响。.重要结果：1．活络效灵丹对在体大鼠心肌I/R的影响实验结果显示，能改善血流动力学参数，改善血清酶学水平，提高抗氧化酶的活性，减少心肌梗死范围，从而发挥活络效灵丹抗心肌缺血再灌注损伤的药理作用。.2．活络效灵丹对在体大鼠心肌I/R心肌Wnt/β-catenin信号通路影响的实验及对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤的实验表明其能可以通过调节血流动力学参数、改善心肌酶指标、心肌梗死范围及调节Wnt/β-catenin信号通路中关键因子Wnt1、Dsh、GSK-3β、β-catenin、C-myc的基因及蛋白表达，以减轻心肌缺血再灌注损伤。.3．活络效灵丹对缺氧/复氧损伤心肌细胞Wnt/β-catenin通路的影响结果显示，对通路中关键分子GSK-3β、β-catenin、c-myc的蛋白、基因表达具有调节作用从而发挥其抗心脏缺血再灌注损伤的作用。.本项目明确了研究活络效灵丹作用于Wnt/β-catenin通路的具体靶点，阐明了活络效灵丹通过调控Wnt/β-catenin通路抗心肌缺血再灌注损伤的分子机制，对活络效灵丹的深入基础研究及临床应用具有重要的科学意义。