基于体内动态效应物质变化规律的栀子炮制机理研究

Lucubrating scientific intension of processing technology of Chinese medicine so as to clarify its effective substances about efficacy changes, which is the key and basic research work for Chinese processing subject. This project takes the clinical common roasted processed products of Gardenia jasminoides as the research objects, combined with previous work, based on the dynamic process in vivo by using multiple chemical fingerprint chromatography in vitro (iridoid, diterpenoid pigments, phenolic acids, etc.) and dynamic serum, urine effect chromatograph in vivo to elucidate the direct substance group and its variation; Integrated pharmacokinetic study will be involved in obvious dynamic of principal component (group) to reveal their pharmacokinetic characteristics; Simultaneous metabolomics research will be carried out for evaluating antipyretic, hemostatic effect and its mechanism about different processed products of Gardenia through the analysis of the overall change variation on metabolic fingerprinting and biomarker; And the combined model of PK and PD is adopted which can clarify the scientific intension of processed gardenia by BP and etc. Furthermore, a research model "stereo and correlation analysis identification of effective substance (Group) - multiple component integration model in vivo pharmacokinetic to elucidate metabolic pathways-metabonomics to validated pharmacological effects" will be built by combined serum chemistry, pharmacokinetics and metabonomics for exploring the effective substance foundation dynamic variation in vivo.Also,this study will offer the demonstration research for similar Chinese medicine processing.

挖掘传统炮制技术的科学内涵，阐明其与饮片功效变化相关的效应物质，是中 药炮制学科核心的基础性研究工作。本项目以栀子临床常用炒制饮片为研究对象，结合前期 工作基础，基于体内动态变化过程，采用体外多重化学成分指纹谱（环烯醚萜、二萜色素、 酚酸等）表征和体内动态血清、尿液效应谱相结合，明确栀子饮片体内直接作用物质群的组 成及其变化规律；对有明显消长规律的主成分（群）开展其整合药代动力学研究，揭示其体内药代特征；同步进行代谢组学研究，通过对代谢指纹谱和生物标志物的整体变化规律分析，评价栀子不同饮片解热、止血作用的药效变化规律及其作用机制；采用神经网络等方法建立PK-PD 相关性数学模型，以阐明栀子炒制机理的科学内涵。同时探索建立体内外关联分析综合辨识饮片直接作用物质（群）-多成分整合药代动力学阐明代谢特征-代谢组学验证药效的体内效应物质动态变化研究模式，为同类饮片提供示范研究。

中药饮片发挥疗效具有多靶点、多环节、整体性和网络效应的特点，以饮片体内过程分析为切入点，有助于深入地揭示中药饮片的药效物质进而阐释炮制机理。.（1）基于体外多层面的化学物质群表征和体内血清效应成分相结合，基本明确了栀子不同饮片体内作用物质群。通过液质鉴定结合HPLC色谱图差异，从生、焦、炭栀子中分别鉴定出170个、203个、199个成分，明确了三种饮片的成分组成差异；红外光谱发现栀子炒制过程糖苷类成分变化显著。建立了三种饮片的环烯醚萜和色素总量以及11个成分的HPLC同步测定以及一测多评定量方法，结合焦品和炭品炮制过程监控，发现栀子饮片外观颜色变化和环烯醚萜总量呈负相关，和色素总量呈正相关，与栀子炒制过程中的变化趋势一致。体内血清化学鉴定了11个原型入血成分，初步探讨了3个成分的体内血清动态变化规律。.（2）建立了基于正常/模型动物体内多成分整合药代动力学方法，从吸收方式、滞留时间、达峰时间、最大血药浓度等体内过程的差异，揭示了栀子不同饮片在解热、止血作用方面的体内特征差异。6种成分的整合血药浓度-时间曲线在正常和发热大鼠体内均为单峰吸收，焦品和炭品给药组中达峰浓度较低，与栀子饮片解热作用较弱有关。在胃出血模型中，生栀子和栀子炭的平均滞留时间和半衰期延长，表明栀子炭作用于胃出血模型呈现快吸收，慢消除的特点。.（3）基于代谢组学发现了栀子不同饮片差异性的生物标志物及其不同的代谢通路，在解热模型中，生栀子调节缬氨酸、亮氨酸与异亮氨酸的生物合成，焦栀子和栀子炭调节甘油三酯代谢，栀子炭还调节鞘磷脂代谢通路。在胃出血模型中，生、焦、炭栀子均可调节缬氨酸、亮氨酸与异亮氨酸生物合成与甘油三酯代谢通路，而栀子炭还调节组氨酸代谢通路；结合网络药理学研究预测了栀子解热和止血作用网络靶标，阐释了栀子饮片药效作用的差异。.（4）建立了PK-PD关联分析模型，在解热模型中，栀子环烯醚萜类成分不存在剂量依赖性，推测该类成分为栀子炮制品的药效物质基础。.课题构建了基于体内外关联分析综合辨识饮片体内直接作用物质（群）—多成分整合药代动力学阐明代谢特征—代谢组学验证药效的体内效应物质动态变化研究模式，为深入地阐释饮片炮制机理提供了示范研究。.