生物素-亲和素系统锚定肝素于胰岛表面促进胰岛再血管化和抑制即刻血液介导的炎症反应的研究

(限400字)：移植胰岛微血管缺失和即刻血液介导的炎症反应（IBMIR）是目前影响胰岛移植效果的最主要因素。肝素对于血管的再生具有非常重要的意义；同时，临床胰岛移植多应用肝素来抑制IBMIR，但全身肝素化增加了出血的风险。亲和素同时具备生物素和肝素两个较强的结合位点；。本课题拟利用亲和素这一特性，应用生物素-亲和素系统，将肝素锚定于胰岛的表面，研究胰岛表面高浓度的肝素对于胰岛再血管化过程的促进作用和抑制IBMIR，同时达到避免全身应用大剂量肝素带来出血风险的目的。本研究关注胰岛移植面临的主要问题：胰岛移植物营养不足和供胰不足，从促进胰岛血管化的角度出发改善胰岛移植物营养供应；从减少移植物早期大量丢失的角度出发，缓解胰腺供体不足。理论上具有先进性，而且对于提高胰岛移植效果具有重要理论价值和现实意义。

胰岛移植是根治胰岛素依赖型糖尿病的理想方法.但只有30%的受者移植后不依赖胰岛素。胰岛分离带来的微血管缺失和由凝血系统激活导致的即刻血液介导的炎症反应（IBMIR）是目前影响胰岛移植效果的最主要因素。因此，促进胰岛再血管化和抑制凝血系统激活对于提高胰岛移植效果具有重要作用。肝素对于血管的再生具有非常重要的意义；同时，临床胰岛移植多应用肝素来抑制IBMIR，但全身肝素化增加了出血的风险。亲和素同时具备生物素和肝素两个较强的结合位点,本课题拟应用生物素—亲和素系统，将肝素锚定于胰岛的表面，研究胰岛表面高浓度的肝素对于胰岛再血管化过程的促进作用和抑制IBMIR，同时达到避免全身应用大剂量肝素带来出血风险的目的。首先，我们建立了稳定可靠的成人、猪和小鼠胰岛分离、纯化和培养技术方案。第二是将分离、纯化后的胰岛依次和5种生物素、亲和素、肝素孵育培养，激光共聚焦显微镜观察胰岛表面肝素化效果；AO/PI染色观察肝素化前后胰岛活力率的变化；胰岛素释放试验比较观察。证明TFP-biotin介导胰岛表面肝素化效果最好，肝素化前后胰岛活力率的变化无差异，肝素化和未肝素化胰岛具备相似的胰岛素释放反应。生物素—亲和素技术是一种安全、有效的胰岛表面肝素化处理方法。第三是通过体外培养和体内移植实验证明了胰岛表面肝素化可以促进血管内皮细胞的再生，进而促进胰岛再血管化，改善胰岛血供。第四是通过体外模拟血液循化实验和体内门静脉移植实验证明了胰岛表面肝素化可以显著抑制即刻血液介导的炎症反应，减少移植早期胰岛的丢失。上述研究表明，生物素—亲和素技术是一种安全、有效的胰岛表面肝素化处理方法，胰岛表面肝素化可以促进再血管化和抑制IBMIR,而没有出血风险和胰岛毒性，进而提高移植效果。