ICOS/B7RP-1通路在γδTreg诱导造血干细胞移植后耐受性树突状细胞生成的作用及机制研究

Acute graft versus host disease (aGVHD) is a major complication after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. Regulatory γδT cells (γδTregs) is a novel subset of T cells with negative immunoregulation property. In our previous study we have established a high efficient induction,expansion and enrichment system of γδTregs. And for the first time we found that demethylation-induced γδTregs had an enhanced role in aGVHD prevention. Moreover, higher expression level of ICOS were found in demethylation-induced γδTregs than in common γδTregs. ICOS plays important roles in negative immunoregulation. So we hypothesized that enhanced ICOS expression might play important roles in tolerant dendritic cell induction thus contributed to reduced instensity of aGVHD via enhanced ICOS/B7RP-1 signaling pathway. The current study will first clarify different ICOS expression levels on γδTregs have important roles in tolerant dendritic cell induction including inhibiting DC maturation, DC attachment and migration as well as its underlying mechanisms(STAT3,NF-κB, MAKP，PKC ). Next we will verify the above roles and mechanisms in aGVHD mice model. The research can lay the foundation for novel mechanisms ofγδTregs on GVHD regulation and try to find new regulation target.And also the research will provide novel clues for GVHD prevention and treatment.

急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因造血干细胞移植（HSCT）的主要并发症。新近发现调节性γδT(γδTreg)细胞具有免疫调控作用；前期我们利用去甲基化建立了γδTreg的培养体系，首次发现去甲基化诱导的γδTreg具备更强的aGVHD 负向调控作用且ICOS表达上调。预实验表明，阻断ICOS表达的γδTreg不能抑制脂多糖（LPS）诱导的树突状细胞(DC)成熟，提示去甲基化诱导该细胞ICOS上调后ICOS/B7RP-1通路增强可能在诱导耐受性DC生成致负向调控ａGVHD中起关键作用。本项目拟通过体外细胞共培养明确γδTreg不同ICOS水平对耐受性DC生成(抑制DC成熟和黏附迁移)的影响及其分子机制(影响STAT3、NF-κB、MAKP和PKC活性等)，进而在小鼠aGVHD模型中验证上述作用和机制。本研究将阐明γδTreg调控ａGVHD的新机制，为发现调控aGVHD的新靶点奠定基础

异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）是治疗恶性血液系统疾病的有效手段，急性移植物抗宿主病（aGVHD）成为阻碍移植成功的关键因素之一。近年来越来越多的免疫细胞亚群被发现在aGVHD调控中起重要作用，过继免疫细胞输注调控aGVHD具有较好的临床应用前景。调节性γδT细胞（γδTreg）是新发现的γδT细胞亚群，能负向调控小鼠allo-HSCT后aGVHD但不影响GVL效应，但机制尚未明确。抗原提呈细胞树突状细胞（DC）在aGVHD发生发展的病理生理过程中起重要作用。而αβTreg与免疫耐受性DC之间有互相诱导生成的作用，两者共同参与维持移植后的免疫耐受。因此，我们推测γδTreg诱导免疫耐受性DC的生成是其发挥负向调控aGVHD的机制之一。在本研究中，我们首先通过细胞共培养实验、磁珠分选、流式细胞术、荧光共聚焦显微镜、表达谱芯片等技术手段，在体外研究了γδTreg对DC的免疫调控功能。γδTreg与iDC共培养后能显著抑制LPS促进的iDC成熟，CD80、CD86、CD40、HLA-DR表达水平显著下调，该抑制作用依赖于ICOS/ICOSL的结合，同时还能显著抑制iDC的吞噬功能。γδTreg与mDC共培养后能显著抑制mDC的黏附功能，以及向CXCL12的迁移功能，相应的CXCR4表达下调，而对CCR7无影响，对黏附功能的抑制同样依赖于ICOS/ICOSL的结合。与γδTreg共培养后iDC和mDC刺激活化T细胞的能力均显著降低。我们进一步构建人源化GVHD模型并同时回输γδTreg细胞，在人源化小鼠aGVHD模型体内环境中发现γδTreg对外周血及脾脏DC均有负向调控功能，但有所不同。γδTreg显著下调外周血人DC的共刺激分子表达水平，但对脾脏中人DC的共刺激分子抑制作用不明显；相反，γδTreg能显著抑制脾脏中人DC的迁移黏附功能，但对外周血中人DC的黏附迁移功能无显著影响。综上，本研究通过体内外实验证明了γδTreg可通过诱导免疫耐受性DC的生成发挥负向免疫调控aGVHD的作用，为γδTreg防治aGVHD提供了理论依据，具有重要的意义。