p32受体靶向纳米粒包载MBD1siRNA治疗胰腺癌淋巴转移的研究

胰腺癌的淋巴结转移与甲基化结合域蛋白MBD1的异常表达密切相关，我们前期研究发现siRNA沉默MBD1基因可以改变胰腺癌甲基化相关基因和蛋白的表达，尤以与胰腺癌淋巴转移相关的蛋白表达变化更明显；同时还证实PLGA生物降解纳米粒作为MDB1siRNA基因治疗载体的科学性、可行性和特殊的缓释效果。本课题将承接既往研究结果，以MBD1为治疗靶基因，PEG-PLGA共聚物为纳米载体，线粒体/细胞表面蛋白p32/gC1qR为受体介导，合成新型的受体靶向纳米基因治疗缓释系统- - LyP-1-MDB1siRNA-PEG-PLGA生物降解纳米粒。通过体外实验研究该系统对人胰腺癌细胞的靶向性和生物学行为影响，并以人胰腺癌淋巴转移动物模型为平台，研究其主动靶向抑制胰腺癌淋巴转移的疗效和作用机理，探讨LyP-1-PEG-PLGA纳米粒作为受体淋巴靶向运载和基因治疗载体的可行性和科学性。

研究背景及目的：胰腺癌的淋巴结转移与甲基化结合域蛋白MBD1 的异常表达密切相关，我们前期研究发现siRNA 沉默MBD1 基因可以改变胰腺癌甲基化相关基因和蛋白的表达，尤以与胰腺癌淋巴转移相关的蛋白表达变化更明显。本课题将承接既往研究结果，以MBD1 为治疗靶基因，MWNTs为纳米载体，线粒体/细胞表面蛋白p32/gC1qR 为受体介导，合成新型的受体靶向纳米基因治疗缓释系统- - LyP-1-MDB1siRNA-MWNTs生物纳米粒。..方法和结果：1．LyP-1-MWNTs、MWNTs分散液稳定性观察：所制成的LyP-1-MWNTs、MWNTs分散液均呈黑色，分散均匀，室温下稳定性良好，静置3个月后均未出现明显沉淀。2．透射电镜观察：MWNTs呈长管状，表面相对光滑，边界相对清晰，管芯透明管壁不透明，长度100～200 nm；MWNTs枝接LyP-1多肽后，长管状结构未发生改变。3. MTT法检测胰腺癌细胞株生长抑制情况：GEM、MWNTs-GEM、LyP-1-MWNTs-GEM的细胞抑制率基本均具有明显的时间依赖性，实验组细胞株凋亡明显。4. 流式细胞仪测定细胞凋亡结果显示LyP-1-MWNTs-GEM组的胰腺癌细胞株BXPC-3-LN5的细胞凋亡率高于其他各组。5.动物移植瘤实验表明，转染MBD1siRNA 质粒的裸鼠移植瘤生长速度明显较对照组减慢，且转染组在MBD1 下调的同时，抑癌基因CDH-1 与Rb 的表达明显上调。..结论与意义： LyP-1-MDB1siRNA-MWNTs在一定浓度时能依赖靶向效能显著抑制BxPC-3-LN5细胞增殖，促进其凋亡。