肝脏基质细胞诱导的调节性树突状细胞对CD8+T细胞功能的调控作用及其机制研究

The liver is an organ which favors the induction of immune tolerance rather than protective immune responses, but its mechanism remains poorly understood. In preliminary experiments, we found that regulatory dendritic cell (DCreg) induced by liver stromal cells can inhibit the proliferation of CD8+T cells through the secretion of NO. Accordingly we made the scientific hypothesis as follows: mature dendritic cells (mDC) in liver stromal microenvironment can be reprogrammed into DCreg, which play an important role in maintaining hepatic immune tolerance and immune homeostasis through negative regulation of CD8+T cells. Transfer of DCreg induced by liver stromal cells may affect the outcome of autoimmune hepatitis. Using cellular immunology and molecular biology experimental techniques, the project aims to investigate the effect of liver stromal cells on the development and differentiation of mDC. The effect of DCreg on the activition, proliferation, apoptosis and differentiation of CD8+T cells will also be studied. Further work will be performed to investigate the role of DCreg in treatment of autoimmune hepatitis. This project will help us to understand the influence of DC plasticity on hepatic immune tolerance, and provide a theoretical basis for treatment of autoimmune hepatitis by modulating DC function in the future.

肝脏是一个具有免疫耐受功能的器官，但其作用机制尚不清楚。在前期的预实验中我们发现肝脏基质细胞诱导的调节性树突状细胞(DCreg)能够通过分泌NO抑制CD8+T细胞的增殖。据此提出如下科学假说：成熟树突状细胞(mDC)可以被肝脏基质微环境重新编程而转变为DCreg，它们通过负向调控CD8+T细胞在维持肝脏免疫耐受和免疫自稳中起重要作用，回输DCreg可以影响自身免疫性肝炎的转归。本项目拟采用细胞免疫学与分子生物学等研究手段，深入探讨肝脏基质细胞对mDC分化发育和功能的影响及调控机制，分析肝脏基质细胞诱导的DCreg对CD8+T细胞活化、增殖、凋亡和分化的影响及调控机制，并进一步观察肝脏基质细胞诱导的DCreg对自身免疫性肝炎的治疗作用及调控机制。本项目的完成有助于理解DC的可塑性在肝脏免疫耐受中的作用，为自身免疫性肝炎的治疗开拓新的思路并提供理论依据。

树突状细胞(DCs)作为专职性抗原提呈细胞是机体免疫应答反应的中心环节，研究机体各器官微环境对DCs生物学功能的影响具有重要价值。肝脏是一个具有免疫耐受功能的器官，但其作用机制尚不清楚。本研究发现肝脏基质细胞（LSC）能够诱导成熟树突状细胞（mDCs）分化形成调节性树突状细胞(DCreg)，这种DCreg体外存活时间较mDCs明显延长，并高表达CD11b，低表达CD11c、Ia、CD80、CD86、CD40。体内外实验结果显示DCreg能够抑制抗原特异性CD8+T细胞增殖，但不影响CD8+T细胞的活化和IL-2、IFN-γ的分泌，DCreg通过分泌NO负向调控CD8+T细胞的增殖和功能。本研究构建了自身免疫性肝炎模型，回输肝脏基质细胞诱导的DCreg可以影响自身免疫性肝炎的转归，对自身免疫性肝炎的治疗作用，DCreg通过负向调控CD8+T细胞在维持肝脏免疫耐受和免疫自稳中起重要作用。浆细胞样树突状细胞(PDCs)及其来源的IFN-α在机体抗病毒免疫应答中发挥了至关重要的作用。本研究发现慢性乙肝人群的PDCs数量明显减少，PDCs表达CD55和CD59的水平显著降低，对补体介导杀伤的敏感性显著增强。进一步发现过表达乙肝病毒X蛋白于PDC中明显的抑制CD55和CD59的表达，表明乙肝病毒通过其X蛋白增强补体介导的PDCs的杀伤，以此降低PDCs相关的抗病毒免疫应答。令人感兴趣的是，作为慢性乙肝的主要治疗药物IFN-α，在高浓度和低浓度下对PDCs表达CD55和CD59的作用不同，其中高浓度显著的降低CD55和CD59的表达，反之低浓度增强。机制研究发现，高浓度IFN-α以及HBVx抑制CD55和CD59的效应与STAT3信号通路的活化有关。进一步研究表明，STAT3通过诱导miR-let-7靶向抑制了CD59的表达。本项目的完成有助于理解DCs的可塑性在肝脏免疫耐受中的作用，为自身免疫性肝炎的治疗和开拓新的思路并提供理论依据，并为指导使用IFN-α治疗慢性乙肝的剂量选择提供了参考依据。