从肿瘤间质纤维母细胞的活化与分化探讨化痰散结中药的抗肿瘤机理

肿瘤间质中的纤维母细胞与肿瘤细胞生长、转移密切相关。阻断纤维母细胞的活化或诱导其多向分化，可能为抗肿瘤药物作用的新靶点。我们已往的研究表明：化痰散结药物作用于肿瘤间质，可降低某些粘附分子的表达，但其对间质中主要细胞类型纤维母细胞的活化及分化调节，目前缺乏研究。本课题建立大鼠原位种植胃癌模型，观察化痰散结中药对癌及癌周组织中纤维母细胞的活化及诱导分化的影响，采用RT-PCR、Westernblotting等方法对诱导活化的相关信号通路进行验证，再以iRNA技术干扰，观察其对肿瘤生长及信号通路的影响。旨在通过回答如下问题：化痰散结中药是否阻断间质纤维母细胞的活化；能否诱导其多向分化；对诱导活化的相关信号通路会产生何种影响，从间质纤维母细胞活化分化的角度对化痰散结中药的抗肿瘤机理进行深入探讨，丰富了中医治疗肿瘤基本大法之一"化痰散结法"的科学内涵，为临床治疗提供科学依据。

肿瘤间质为肿瘤生长提供营养支持的同时主动参与对肿瘤发生和发展的调控。纤维母细胞是间质中的主要细胞类型，活化后可分化为癌相关成纤维细（TAF），提供促癌信号。阻断纤维母细胞的活化或诱导其多向分化可能为抗肿瘤药物作用的新靶点。我们在既往研究基础上，设计这个课题，通过建立大鼠胃种植瘤模型，采用Westernblot、Real-time PCR方法首先观察肿瘤组织、瘤周组织及大鼠正常胃组织中纤维母细胞活化相关蛋白的表达差异，同时以化痰散结药物干预，探讨化痰散结药对纤维母细胞活化的影响；继之又观察了化痰散结药物对纤维母细胞分化的诱导，以期回答化痰散结药物是否阻断了纤维母细胞活化的同时还诱导了其分化；最后采用全基因芯片筛选出化痰散结药物影响肿瘤细胞生长的信号通路，再以siRNA片段干扰后，验证其对信号通路及肿瘤生长增殖的影响，对化痰散结中药的抗肿瘤机理进行深入探讨。结果发现：正常大鼠胃组织中CD34的表达明显高于模型鼠肿瘤组织中的表达（p＜0.01），而作为激活的纤维母细胞表面标志的FAPα与α-Sma的表达则低于肿瘤组织（p＜0.01），就肿瘤组织与瘤周组织相比，纤维母细胞激活蛋白的表达也存在着显著差异，说明肿瘤组织中存在纤维母细胞的激活；当用化痰散结药物干预后发现，中药组中CD34的表达均上调，FAPα、α-Sma的表达则均下调，且大剂量组差异显著（p＜0.05）；全基因芯片筛选出MAPK信号通路和PI3K/AKT通路，干扰靶向目的基因PKCζ后，发现其下游位于MAPK通路上的2个基因表达也随之显著降低（p＜0.01）；同时其位于PI3k/AKT通路上上游基因的表达也降低，差异显著（p＜0.01）；但纤维母细胞分化诱导实验，仅观察到化痰散结中药诱导纤维母细胞凋亡的趋势，并未发现其在诱导纤维母细胞成脂肪、成骨分化中表现出与对照组之间的明显差异。我们的研究认为阻断微环境中间质纤维母细胞向肿瘤相关成纤维细胞的活化是化痰散结中药抗肿瘤途径之一；其通过干扰MAPK信号通路来抑制肿瘤细胞生长增殖。此前这些研究均缺乏报道。我们的研究结果既从间质纤维母细胞活化角度对化痰散结中药作用机理进行了新的阐释，又进一步对其作用的信号通路进行了探索，对化痰散结中药抗肿瘤的作用机理进行探索与补充，丰富了中医治疗肿瘤基本大法之一“化痰散结法”的科学内涵，为临床治疗提供科学依据的同时还可能提供了新的药物靶点