益肾散结法对肾脏间质纤维化的影响及机理研究

Renal interstitial fibrosis is a variety of kidney disease to end-stage renal failure is common pathway, renal tubular epithelial cells transdifferentiation and renal fibroblast proliferation is a key link between the renal interstitial fibrosis, if can effectively inhibit the transdifferentiation of renal tubular epithelial cells and renal fibroblast proliferation can prevent its progression. We will pathologic microscope as an extension of the traditional Chinese medicine of the microscope, the pathological changes and TCM combination, put forward its pathogenesis is deficiency of kidney-qi, phlegm and blood stasis, achieved good clinical efficacy. This project Sanjie prescription of tonifying kidney and legislation, proposed: 1 experiments in vivo observation of Yishen Sanjie legal agent on the inhibitory effect of the rat renal interstitial fibrosis, and the effects on the quality of collagen type Ⅲ, transforming growth factorβ 1,α- smooth muscle actin expression, matrix metalloproteinase 2 kidney; in vitro cell culture, to observe the simulated in vivo kidney tubular epithelial cells of interstitial fibrosis in environment transdifferentiation and renal fibroblast proliferation method in vitro; 3 by in vivo and in vitro studies, clarify Yishen Sanjie legal agent resistant mechanism of renal fibrosis, providing theoretical basis for further research on control method renal interstitial fibrosis and prescription; progress on preventing renal disease has important significance.

肾脏间质纤维化是多种肾脏疾病发展到终末期肾功能衰竭的共同途径，肾小管上皮细胞转分化及肾成纤维细胞的增殖是肾脏间质纤维化的关键环节，若能有效抑制肾小管上皮细胞转分化及肾成纤维细胞的增殖就能防止其进展。我们将显微镜下的病理改变作为中医望诊的延伸，把显微镜下的病理变化与中医辨证有机结合，提出其病机为肾气不足、痰瘀互结，取得了良好的临床疗效。本项目以益肾散结立法组方，拟进行：1.体内实验研究观察益肾散结法制剂对大鼠肾脏间质纤维化的抑制作用，以及对肾脏间质Ⅲ型胶原、转化生长因子β1、α-平滑肌肌动蛋白、基质金属蛋白酶表达的影响；2.体外细胞培养研究，观察其对模拟体内肾脏间质纤维化环境下肾小管上皮细胞转分化及肾成纤维细胞增殖的抑制作用；3.通过体内与体外实验研究，阐明益肾散结法制剂抗肾脏间质纤维化的作用机理，为进一步研究防治肾脏间质纤维化的有效方法及方药提供理论依据；对防止肾脏疾病的进展具有重要意义。

随着人类对慢性肾脏病发病及防治认识水平的不断提高，发现肾脏间质纤维化是所有慢性肾脏病发展到后期的共同病理学特征，是多种慢性肾脏病发展至终末期肾功能衰竭的共同通路。因此，要降低终末期肾病的发病率，势必以防治肾脏间质纤维化作为突破口。为了研究益肾散结法制剂对肾脏间质纤维化的抑制作用及其作用机理，我们分别采用了UUO模型和5/6肾切除模型进行体内实验，以益肾散结法制剂进行干预，观察肾脏间质纤维化的变化和肾功能状态的变化，以及益肾散结法制剂对纤维化组织细胞因子的影响。研究表明：益肾散结法制剂能减轻模型大鼠肾小管、肾间质的损伤程度和纤维化面积；降低血清肌酐和尿素氮水平；肾组织I型胶原、Ⅲ型胶原、TGF-β1、α- SMA、PAI-1、pSmad2、pSmad3表达减少、E-Cadherin及Smad7表达增强。体外细胞实验观察了模拟体内肾脏间质纤维化环境下，益肾散结法制剂对肾小管上皮细胞转分化及肾脏成纤维细胞增殖的影响，以及对肾小球固有细胞-足细胞及系膜细胞结构与功能的影响。研究表明：益肾散结法制剂含药血清能抑制肾小管上皮细胞TGF-β1、α- SMA表达，使肾脏成纤维细胞α- SMA表达减少；能减少阿霉素肾病模型大鼠尿中足细胞计数，促进肾组织Podocin蛋白的表达；益肾散结法制剂中两种主要药物的有效成分能够有效抑制大鼠肾小球系膜细胞的氧化应激反应。上述研究证实，益肾散结法制剂对肾脏间质纤维化具有显著的抑制作用，其主要机制可能是通过抑制肾小管上皮细胞转分化和肾脏成纤维细胞的增殖，抑制肾组织I型胶原、Ⅲ型胶原、TGF-β1、α- SMA及PAI-1的表达，上调E-Cadherin表达，调控TGF-β1/Smads信号通路而实现的。此外，还证实了益肾散结法制剂中两种主要药物的有效成分山茱萸多糖和熟地黄多糖具有保护足细胞结构与功能、抑制肾小球系膜细胞的氧化应激反应，减轻肾小球损伤程度，从而延缓肾脏间质纤维化的发生与进展的作用。此研究的完成，阐明了益肾散结法制剂抗肾脏间质纤维化的作用机理，为益肾散结法制剂防治肾脏间质纤维化提供了理论依据。