从脂肪细胞转分化探讨滋阴泻火方对青春期性发育的调控

瘦素可刺激GnRH兴奋HPGA，调节青春期性启动；其确切机制尚未阐明，目前研究认为瘦素不是关键性启动因子。PPARs 参与性腺发育和性激素合成，PPARγ是联系能量代谢和生殖的关键因子。我们推测通过PPARγ和C/EBPα表达调控脂肪细胞转分化，进而触发瘦素信号启动HPGA。这与我们提出的脾肾互赞-膏脂互化-天癸萌发理论高度统一。为证实这一假说，我们用临床疗效确切的滋阴泻火方灌服性早熟模型大鼠，采用RT-PCR、Western blot方法检测脂肪组织PPARγ、C/EBPα转录和翻译水平，观察脂肪细胞分化、增殖及形态学改变，测定下丘脑GnRH mRNA及瘦素mRNA表达，E2、LH、FSH水平及性腺组织；分析脂肪细胞-瘦素-下丘脑-性腺、性激素四个层面的作用机制。本课题将从新的视觉阐释滋阴泻火方治疗儿童性早熟的机理，拓展脂肪细胞转分化调控青春期性发育的新认识，为中医药临床防治提供新靶点。

人类青春期的发育受下丘脑-垂体-性腺轴的控制；而在青春期的启动过程中脂肪的积累是一个决定性的条件，只有基本体脂达到最低阈值才能维持正常的月经周期和触发青春期。瘦素是脂肪组织传递给生殖系统的一种特殊代谢信号；同时，脂肪细胞间存在规律性的转移分化，导致脂肪组织可能发生量变或功能改变；可以说，脂肪代谢是调控生殖的保守环节，PPARγ对青春期性发育的调控取决于脂肪细胞转分化过程。中医学认为，阴虚火旺是性发育发生的主要病机，而膏脂应该是性发育启动的关键性调控因子；脾肾互赞，膏脂互化，则天癸萌发，这与现代医学“脂肪-下丘脑-性腺轴”启动学说相一致。本项目选取正常对照组、性早熟模型组、曲普瑞林组、罗格列酮组、中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组共7组，达那唑皮下注射建立中枢性性早熟模型。结果发现：1．滋阴泻火方大、中剂量及曲普瑞林能抑制达那唑诱导的雌性大鼠性早熟的发生，使大鼠的性腺发育和E2、LH、FSH的性激素维持在正常青春前期水平。2.滋阴泻火方大、中剂量可以下调性早熟模型大鼠下丘脑GnRH mRNA和Leptin mRNA表达；可以抑制脂肪组织PPARγ、C/EBPα mRNA和蛋白表达以及脂肪细胞增殖。3.罗格列酮能有效抑制达那唑诱导的性早熟模型雌性大鼠性激素水平的升高，降低下丘脑GnRH mRNA的表达，抑制下丘脑Leptin mRNA表达水平，降低脂肪细胞胞浆中脂肪的堆积，降低脂肪细胞PPARγ mRNA的表达，但不能抑制外周性腺的发育和脂肪细胞PPARγ的蛋白质水平。据此，可以认为，1.滋阴泻火方大、中剂量对大鼠性早熟模型HPGA的抑制作用与曲普瑞林是相似的，进一步印证了中医对性早熟阴虚火旺基本病机的普遍认识和滋阴泻火治疗原则的正确性，并发挥了性发育的脾肾互赞、膏脂互化理论，有力证实了滋阴泻火方对HPGA的有效干预。2.初步证实了滋阴泻火方通过PPARγ、C/EBPα通路促进脂肪细胞增殖分化，进而抑制Leptin分泌来调控HPGA的性发育进程，为进一步诠释脂肪-下丘脑-性腺轴的调控机制提供了客观的实验依据，推测该作用可能是滋阴泻火方治疗性早熟的主要机理。3.部分验证了罗格列酮对性激素水平、脂肪细胞和Leptin的影响，为进一步探索其作用机理、干预途径以及儿童性早熟的新的治疗药物提供了可靠的实验依据。