从kisspeptin/GPR54信号通路探讨滋阴泻火中药合剂治疗性早熟的神经内分泌机制

近年来儿童性早熟发病率逐年升高。目前国际上采用促性腺激素释放激素拟似物治疗该病虽有较好疗效，但费用昂贵，且有一定的副作用。本校附属儿科医院研制的滋阴泻火中药合剂在临床上治疗性早熟取得了很好的疗效，但有关其治疗儿童性早熟机理的研究尚不完善。G蛋白偶联受体54（G protein coupled receptor 54）和其内源性配体kisspeptin信号对青春期启动时GnRH 神经元的激活起关键作用,是青春期启动的闸门。在本课题中，我们拟在达那唑诱导的性早熟大鼠模型上，采用神经生物学和分子生物学技术，通过观察滋阴泻火中药对性早熟大鼠青春期发育过程中下丘脑GPR54/kisspeptin以及GABA及其不同受体亚型表达的影响,探讨GPR54/kisspeptin在滋阴泻火中药合剂治疗性早熟中枢机制中的作用，用现代医学的语言阐释中药治疗该病的机理，为进一步推广中药在临床应用提供现代科学依据。

本课题以达那唑诱导的雌性性早熟大鼠为模型，通过观察下丘脑kisspeptin/GPR54及GABA受体的表达规律，探讨kisspeptin/GPR54和GABA受体在性早熟发病机制的作用，观察滋阴泻火中药合剂对其表达的影响，探讨滋阴泻火中药合剂的作用机制。.结果发现：. 性早熟大鼠阴门开启和建立规律性周期的时间明显提前，卵巢和子宫的脏器系数较正常组大鼠明显增加，中药组大鼠以上指标均显著低于模型组。模型组大鼠血清E2，LH和FSH水平明显升高，中药组上述激素水平显著下降。模型组大鼠下丘脑GnRH的表达显著上调；中药组其表达显著下调。.青春期启动时室周核、弓状核、视前区kisspeptin/GPR54免疫阳性细胞呈特异性表达。ARC、PeN的kisspeptin免疫阳性细胞数在青春期启动后表达减少，POA的kisspeptin细胞数在青春期启动后表达增加；ARC、PeN的GPR54免疫阳性细胞数在青春期启动后表达增加，POA的GPR54免疫阳性细胞数在青春期启动后表达减少。性早熟大鼠青春期启动时Kiss-1/GPR54 mRNA表达水平达峰值并明显升高。滋阴泻火中药合剂可下调性早熟模型大鼠下丘脑Kiss-1、GPR54及GnRH mRNA的表达，抑制ARC、PeN和POA的kisspeptin和GPR54蛋白的释放，诱导MS、DBB和MPOA的GnRH免疫阳性细胞数增加。.模型组大鼠下丘脑GABAA受体α1和α3亚基表达水平显著下调；中药组大鼠下丘脑GABAA受体α1和α3表达水平显著升高。而其他四个亚基的表达在各组之间没有差异。GABA B受体表达水平显著下调；中药组大鼠下丘脑GABA B受体表达水平显著升高。.结论：滋阴泻火中药合剂可以显著缓解雌性性早熟大鼠的性早熟症状，缓解性早熟大鼠亢进的HPGAA功能； Kiss-1/GPR54可能参与促进大鼠青春期提前启动。滋阴泻火中药合剂可通过下调下丘脑Kiss-1/GPR54的表达，抑制GnRH的释放，延缓性早熟大鼠 HPGA的启动。GABA A受体和GABA B受体参与性早熟大鼠的发病机制，滋阴泻火中药合剂可以通过调节GABA受体的表达，进而抑制GnRH的合成释放。