雌激素/孕激素在戊肝病毒感染妊娠晚期孕妇促进病毒复制的机制研究

The pathogenic mechanism of high mortality (>25%) caused by hepatitis E virus (HEV) infection in pregnant women is unclear. We had confirmed that pregnancy serum facilitates HEV replication in vitro. Meanwhile, HEV replication and the concentration of estrogen is interrelated and dosage dependent. Moreover, HEV replication is involved in the inhibition of estrogen receptor alpha (ERα). Therefore, it is possible that the highly increased estrogen and progestin in the third trimester of pregnancy may promote HEV replication. In the present study, the susceptibility to HEV and the viral titers in HEV-infected pregnant women in their first, second or third trimester of pregnancy will be investigated. Meanwhile, the effects of estrogen/ progestin on HEV replication will be explore by addition of analogues or antagonists of estrogen/progestin in HEV-infected A549 cell. Moreover, the interaction between ERα /ERβ/PR and HEV will be finding out by Co-IP, immunofluorescence assays or luciferase assays. Finally, the mechanism of HEV replication be promoted in pregnant women in their third trimester of pregnancy will be further illuminated by study on estrogen signal pathway, PI3K-Akt or Ras-Raf-ERK signal pathways.

戊型肝炎病毒（HEV）感染导致妊娠晚期孕妇较高死亡率(>25%)的原因尚不明确。我们前期发现妊娠晚期孕妇血清具有显著促进HEV复制的能力，并且病毒的复制能力随雌激素水平升高而增强，同时HEV感染抑制雌激素受体的表达。据此我们推测妊娠晚期孕妇剧增的雌/孕激素及其激活的雌激素信号通路可能与HEV的复制密切相关。本项目拟从临床HEV感染的孕妇着手，明确HEV在不同妊娠阶段复制能力的差异；并通过添加雌/孕激素类似物或拮抗剂，探讨雌/孕激素对HEV复制的影响；同时过表达雌/孕激素受体或添加拮抗剂，验证HEV感染对雌/孕激素受体表达的影响，并利用免疫共沉淀、免疫荧光法和荧光素酶活性实验探究HEV与雌/孕激素受体的相互作用关系；通过探讨HEV感染对雌激素信号通路及其下游信号通路的影响，揭示妊娠晚期孕妇感染HEV促进病毒复制的作用机制，为进一步揭示HEV感染对孕妇的致病机制提供基础。

戊型肝炎病毒（Hepatitis E Virus, HEV），是一种严重危害人类健康的病毒性肝炎病原体。孕妇感染HEV后，通常病情重且病死率高，极易发展为肝功能衰竭，尤其是妊娠晚期孕妇，其死亡率可高达25%~30%，并伴有胎儿早产、流产或死胎的现象。然而，HEV感染导致孕妇不良妊娠的机制尚不清楚。为了深入探究妊娠晚期雌激素/孕激素对HEV复制的影响及其作用机制，本项目从临床HEV感染孕妇为切入点，利用HEV感染孕鼠/孕猴模型模拟HEV感染妊娠期孕妇，并从细胞水平进一步验证。结果发现，妊娠孕妇体内病毒滴度显著高于普通人群。.利用HEV体外培养体系明确了妊娠晚期孕妇血清能够促进HEV复制，利用雌激素类似物17β雌二醇和己烯雌酚（DES）显著均能以剂量依赖的形式促进HEV复制，添加雌激素拮抗剂他莫昔芬，则抑制HEV的复制。添加孕激素类似物黄体酮也能促进HEV的复制。同时，我们发现HEV感染抑制雌激素受体的表达。利用共聚焦和Co-IP证实HEV与雌激素受体ERɑ通过与HEV ORF1区域的Hel蛋白结合发生非直接的相互作用。进一步阐明了HEV复制不依赖于Ras-Raf-ERK信号通路，但显著抑制cAMPK-PKA-CREB和PI3K-AKT-mTOR信号通路。利用动物模型，证实了HEV能在孕妇子宫和胎盘中复制，造成严重的病理损伤，从而导致孕妇不良妊娠结局；并一步证实HEV感染导致雌激素和孕激素分泌失调，导致雌激素受体和孕激素受体表达异常；HEV感染孕猴实验，揭示了妊娠期免疫耐受导致宿主天然免疫抗病毒基因ISGs低表达，从而导致HEV感染持续时间延长，导致病毒滴度上升；HEV感染导致Th1型免疫反应，Th1/Th2平衡被破坏是HEV感染导致流产或死胎等不良妊娠结局的重要原因之一。.本研究从临床HEV感染患者中发现HEV感染导致不良妊娠结局这一现象，从细胞分子和动物活体水平进行模拟验证，进而从信号通路和免疫平衡等方面进行分析，阐明了HEV感染造成不良妊娠结局，以及妊娠期雌激素/孕激素水平剧增对HEV复制的影响。为研究HEV的致病机制提供了重要的科学数据，为解决HEV感染导致的不良妊娠结局提供了新的策略。