p21WAF1/CIP1基因在辐射抗拒性鼻咽癌细胞增殖和凋亡中的作用及靶位治疗的研究

鼻咽癌是最常见的头颈部恶性肿瘤，放射治疗是首选方法。但P53蛋白失活，导致肿瘤细胞产生辐射抗拒性，影响治疗疗效和患者生存率，治疗手段尚有待改进。我们的前期研究结果表明：1）通过慢病毒载体将p53基因下游重要且稳定的p21WAF1/CIP1基因过表达，能有效抑制鼻咽癌细胞的成瘤能力；2）从多种中药成分中筛选出的天花粉蛋白（trichosanthin，TCS）能显著抑制不同分化程度鼻咽癌细胞生长，并伴随P21蛋白水平显著增高，且p21启动子转录活性非依赖于p53基因的调控。根据以上结果，本课题拟确证p21WAF1/CIP1基因在鼻咽癌细胞增殖及凋亡中的作用，并通过体内外实验深入探讨p53非依赖性p21信号通路在TCS抗鼻咽癌中的作用机制。本项目的完成将为辐射抗拒性鼻咽癌患者的治疗提供新的基因治疗及药物作用靶点；同时，揭示TCS抗鼻咽癌的分子机制，为TCS抗肿瘤的临床应用提供理论基础和实验依据。

中药虽已应用于鼻咽癌的临床治疗和辅助治疗中，但具体有效成分及具体机制尚不清楚。研究结果显示天花粉蛋白（TCS）能显著抑制人鼻咽癌高分化上皮细胞株（CNE1）和低分化上皮细胞株（CNE2）生长，具有时间和浓度依赖性；且与细胞的恶性程度有关，TCS对CNE1生长抑制作用强于CNE2细胞。TCS抗鼻咽癌的分子机制显示，经TCS处理后两株鼻咽癌细胞表现出差异性。CNE-1以细胞凋亡为主，CNE-2细胞以细胞周期阻滞为主；p21和p53基因及蛋白水平变化趋势也不一致。TCS能诱导CNE2细胞p21启动子转录活性，由于p21转录水平与蛋白水平变化不一致，推测P21蛋白受转录后调节。通过siRNA抑制P53或P21蛋白表达，CNE1细胞和CNE2细胞对TCS的敏感性均降低，说明P53和P21均参与了TCS抗肿瘤作用。体外动物实验显示，TCS能抑制CNE2细胞的生长，但对动物有一定的毒副作用。综上所述，由于不同分化程度的鼻咽癌细胞对TCS的生长抑制作用、诱导死亡途径、及P53和P21的分子的反应上均存在差异，因此针对不同分化程度的鼻咽癌临床治疗的药物选择及治疗靶点选择均会影响疗效和预后。