基于中药多成分整体性特征研究桔梗汤的配伍机制

基于七情理论的中医方剂配伍规律研究，不仅需要关注方剂有效组分/成分的物理化学配伍关系、药理效应配伍关系以及多途径、多靶点的分子生物学配伍机理，还必须关注方剂各成分在体内过程的相互作用。研究方剂各成分（包括有效、辅助甚至"无效"成分）在体内吸收、代谢环节中的相互作用对揭示方剂配伍规律具有重要的意义。本课题选择《伤寒论》经典名方"桔梗汤"为研究对象，研究桔梗汤的药代动力学特征；采用Caco-2细胞、肝微粒体等体内外模型研究桔梗汤的口服吸收和代谢过程；以代谢酶和转运蛋白为切入点，研究桔梗、甘草有效组分（皂苷、黄酮等）间的相互作用，同时关注鞣质、果胶等辅助或"无效"成分对有效组分/成分的作用，揭示桔梗汤中桔梗、甘草配伍的生物药剂学和药代动力学基础，从而阐明桔梗汤的配伍机制和科学内涵。研究结果可为方剂的配伍规律研究提供新的思路，同时可有助于建立科学的方剂物质基础研究评价。

本项目基本按照研究计划实施。采用二甲苯所致小鼠耳廓肿胀模型研究了桔梗、甘草配伍前后抗炎作用的变化，结果表明配伍后两者具有一定的协同抗炎作用，而辅助/无效成分对有效成分的抗炎作用无明显改变。建立了桔梗汤、桔梗、甘草有效成群的指纹图谱和体内定量分析方法，从桔梗汤中初步鉴定出80个化学成分，其中13个来源于桔梗，67个来源于甘草。体外化学成分分析实验表明桔梗、甘草配伍前后各自主要有效成分的化学结构和含量未发生明显变化。药代动力学研究结果显示：桔梗、甘草配伍后，甘草可使桔梗皂苷D的药时曲线下面积（AUC）提高6倍，去芹菜糖-桔梗皂苷D提高2.2倍；桔梗组中桔梗皂苷D2的血药浓度低于定量限，而桔梗汤组中其血药浓度可在8 h内进行定量检测，因此桔梗皂苷D2的AUC值从0提高到134ng/mL*h，说明甘草能够显著提高桔梗皂苷类成分的口服相对生物利用度。桔梗可使甘草苷AUC值提高3.6倍，异甘草苷1.8倍，甘草素降低0.48倍，异甘草素降低0.63倍，甘草酸提高3倍，甘草次酸2.9倍，桔梗总体上能够显著提高甘草黄酮类、皂苷类成分的口服相对生物利用度。药代动力学研究与抗炎药效学实验结果基本一致，两者配伍后具有协同增效的作用。Caco-2细胞实验结果显示，桔梗、甘草配伍对有效成分的吸收影响不大；而肠道菌群试验结果表明：由于桔梗皂苷和甘草黄酮苷、皂苷均属于糖苷类成分，易受到β-D-葡萄糖苷酶等代谢酶的影响（脱糖基代谢），配伍后桔梗、甘草有效成分的代谢均受到一定程度的竞争性抑制，这可能是桔梗汤有效成分群生物利用度提高的一个主要因素。本项目通过中药多成分体内相互作用的探索性研究，揭示了桔梗汤中桔梗、甘草配伍的生物药剂学和药代动力学基础，从体内过程的角度阐明了桔梗汤的配伍机制和科学内涵。