法尼醇X受体上调血栓调节蛋白表达的分子机制及该上调作用在抗炎中的重要性

法尼醇X受体(FXR,一种重要核受体）和血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)均表达于血管内皮细胞，且二者均具重要抗炎功能，但核受体FXR能否调节TM的表达，目前尚不清楚。本项目在率先证实"在血管内皮细胞中，FXR能明显上调TM表达，且这种上调始发于转录水平"的基础上，拟借助报告基因检测、EMSA、Super EMSA、染色质免疫沉淀等技术，详细解析出FXR在Tm基因5＇调控区中的具体结合位点，明确Tm是FXR的一个新靶基因，从而阐明FXR在转录水平上促进TM表达的分子机制；进而经检测活化蛋白C的产生能力、siRNA使Tm基因转录后沉默、检测多个炎症相关分子表达水平等体外实验以及在体观察FXR对TM表达的上调作用和这种上调作用在FXR发挥抗炎功能中的重要性，以期揭示"通过上调TM而发挥抗炎作用"是FXR的一个抗炎新机制，从而为探索以FXR和TM为靶标的抗炎新措施提供科学依据。

血栓调节蛋白(thrombomodulin，TM) 和法尼醇X 受体(farnesoid X receptor，FXR，一种重要核受体）均表达于血管内皮细胞（vascular endothelial cells, VECs），且二者均具重要抗炎功能，但核受体FXR 能否调节TM的表达，目前尚不清楚。本项目首先证实FXR可在VECs中明显上调TM mRNA和相应蛋白的表达；然后借助荧光素酶报告基因检测、电泳迁移率变动实验（Electrophoretic mobility shift assay，EMSA）、染色质免疫沉淀（chromatin immunoprecipitation，ChIP)实验等技术，详细解析出了FXR 在Tm基因5 ＇调控区中的具体结合位点IR8 (-503 AGGTCCtcccaaagTGCCCT-484)，明确了Tm是FXR 的一个新靶基因，从而初步阐明了FXR 在转录水平上促进TM表达的分子机制。体外功能实验显示，FXR上调TM表达后，能在VEC增强活化蛋白C 的产生能力，表明FXR-TM通路能在体外发挥抗炎功能。小鼠体内实验显示，FXR的激动剂能在体上调TM的表达，并发挥抗炎作用。以上研究结果提示，FXR-TM通路是FXR的一个抗炎新机制，该通路可能是抗炎的潜在新靶点。此外，我们的研究还发现（1）FXR可在肝细胞中明显促进CISH(cytokine inducible SH2-containing protein)的表达，并能抑制IL-6诱导的STAT5的磷酸化，提示FXR在抑制细胞因子相关的炎症反应中发挥了重要作用；（2）miR-421可显著抑制FXR的表达，这种抑制作用促进了肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭，提示miR-421 可能是调控FXR水平的重要因素，miR-421-FXR通路可能是肝癌治疗的潜在新靶点。以上有关研究结果已发表论文4篇（其中SCI论文3篇）。