原发性肝细胞癌复发转移基因的鉴定及研究

It is important to find out the genes that involved in the recurrence and metastasis of hepatocellular carcinoma (HCC) and its molecular mechanism in these processes, which are of significances for the clinical diagnosis, therapy and prognosis of HCC. In our previously study, 5 genes have been confirmed to be closely related to HCC recurrence and metastasis using microarray and Real time PCR (RT-PCR) technologies. To determine the role of these genes in HCC metastasis and recurrence, based on the above findings,(1) further researches on these genes have been taken to identify the feasibility of the genes and their protein productions for diagnosis and deciding prognosis of HCC, especially in patients with AFP negative, while the study sample has been extended and analyzed statistically.(2) relationship between the expression levels of these genes in HCC cell lines and cell proliferation, apoptosis, metastasis and angiogenesis.(3) the mechanism of dysregulation of these genes in HCC compared with non-HCC by analyzing the promoter methylation status and DNA copy number variation of these genes in HCC with metastasis. Our research will enrich the theoretical and empirical researches about the early diagnosis and prognosis evaluation of HCC and provide a new target for the drug therapy for HCC.

寻找肝癌复发转移相关基因并阐明其在肝癌复发转移中的分子机制，这对于肝癌的诊断、治疗和预后判断具有重要意义。我们前期利用基因芯片和Real time PCR技术，发现5个基因与肝癌的转移和复发有密切的关系。在本研究中，我们拟针对这些基因，进行深入的研究：1、扩大样本量，分析与肝癌转移复发最密切的基因，并探讨这些肝癌复发转移相关基因及其蛋白产物作为诊断、预后指标的可行性，特别是在AFP阴性肝癌中的诊断价值；2、探讨这些基因在肝癌发生、发展过程中的作用，特别是其与肝癌增殖、凋亡、转移及血管生成的关系；3、针对在肝癌转移过程中起重要作用的基因，探讨其在肝癌中表达失调的分子机制。本研究将为肝癌的早期诊断和预后判断提供新的理论和实验基础，为肝癌的治疗药物开发提供新靶点。

原发性肝癌（简称肝癌）复发转移与基因异常表达、基因调控等密切相关。目前仍然不清楚肝癌复发转移确切分子机制。我们利用基因芯片和Real time PCR 技术，发现了一些重要候选基因与肝癌的转移复发有密切的关系。在本项研究中，我们主要针对SPC24、DLGAP5、ICAM-1、KIF18A、DEPDC1等基因，进行了系列深入的研究。我们在200多例临床背景资料完整的肝癌组织样本中分析了基因的mRNA水平，并探讨了这些相关基因及其蛋白产物作为诊断、预后指标的可行性，特别是在AFP 阴性肝癌中的诊断价值；在细胞学和动物学水平探讨了关键基因在肝癌发生、发展过程中的作用；利用微卫星标志位点以及荧光原位杂交（FISH），分析了肝癌和癌旁组织中关键基因（DLGAP5）的基因组中DNA拷贝数的变异状态。利用甲基化特异性PCR（MSP）方法、或亚硫酸盐测序方法分析了肝癌细胞株、肝癌组织中关键基因（SPC24、KIF18A、DEPDC1和DLGAP5）启动子区域甲基化状态。研究发现高水平的DLGAP5、ICAM-1和KIF18A等与肝癌肝内转移（合并门静脉癌栓）或远处转移、AFP、无瘤生存时间和总体生存时间、或术后复发等有相关性。进而发现DLGAP5基因在肝癌中异常高表达促进肝癌细胞的迁移及侵袭能力，其表达失调机制与DLGAP5启动子区低甲基化水平相关，其甲基化水平经5-氮杂脱氧胞苷类药物处理而发生改变。从表观遗传学和遗传学上整体阐明DLGAP5在肝癌中表达失调的分子调控机制，将为临床肝癌提供新的表观治疗靶标。基因SPC24、KIF18A的mRNA和蛋白水平在肝癌组织中表达明显上调，分别沉默基因SPC24、DLGAP5和KIF18A表达后能明显抑制肝癌细胞增殖、迁移能力，及诱导肝癌细胞的凋亡。在动物学水平也证实了沉默基因KIF18A表达后肝癌细胞成瘤能力明显减弱。此外，ICAM-1、DEPDC1和RHAMM等均可以做为根治性肝癌术后复发监测的有用指标。总之，这些肝癌转移复发重要基因的功能、作用，或表达失调的分子调控机制得到阐明，随着后续扩大样本量进一步验证与分析，最好是多中心研究，这项研究将为肝癌的治疗药物开发提供新靶点，为肝癌的早期诊断和预后判断提供新的、有用的指标。