坦布苏病毒NS1蛋白互作宿主蛋白的筛选及功能研究

Duck tembusu virus (DTMUV) infection is an emerging disease and serious harm to duck breeding industry. Non-structural protein 1 is conserved in flavivirus.The function of NS1 of TMUV is not yet uncovered. In this project, we will investigate the roles of NS1 and its interaction proteins in host in innate immune evasion and pathogenesis caused by TMUV. The cellular location of NS1 protein will be determined via laser scanning confocal microscope (LSCM). Host proteins interaction with NS1 will be screened and identiflied. Studies on roles of host proteins interaction with NS1 independence with signal pathway in cells invasion, components pathway activation/inhabition involved in immune system evasion and pathogenesis. The innate signal pathway regulated by NS1 is determined by host signal pathway proteins interaction with NS1, togather with mRNA transcription of pattern recognition receptors, adaptor and effectors of innate immune system.Block and activation tests will be utilized to determine which signal pathway in innate immune is inhibited by NS1 protein in early infection stage. Finally, these studies will reveal the important roles of NS1 and host proteins interaction with NS1 in host pathogenesis and innate immune response.

鸭坦布苏病毒（DTMUV）感染是严重危害我国养鸭业健康发展的的一种新发传染病。NS1蛋白是黄病毒属病毒较为保守的非结构蛋白，但有关TMUV-NS1蛋白功能的研究国内外尚未见报道。本项目以NS1蛋白和宿主蛋白互相作用为切入点，重点探讨NS1蛋白在病毒先天性免疫逃逸和造成机体组织损伤中的作用。首先利用激光共聚焦技术分析NS1蛋白在细胞内的定位；筛选并鉴定NS1互作宿主蛋白。研究非信号通路相关互作蛋白在病毒侵入宿主细胞、激活/抑制补体途径造成机体组织损伤和免疫逃逸中的作用。筛选信号通路相关互作蛋白和NS1蛋白调节天然免疫信号通路中模式识别受体、信号分子和效应因子等mRNA转录水平，分析NS1蛋白调节的天然免疫信号通路。通过激活和阻断试验进行验证，探讨NS1蛋白在病毒早期感染中逃逸先天免疫应答的作用。通过以上研究，旨在阐明鸭坦布苏病毒NS1蛋白和互作蛋白对机体致病机理和先天免疫应答的影响。

鸭坦布苏病毒感染是严重危害我国养鸭业健康发展的的一种新发传染病。NS1蛋白是黄病毒属病毒重要的非结构蛋白。本项目主要以NS1蛋白和宿主蛋白互相作用为切入点，重点探讨NS1蛋白在病毒先天性免疫逃逸和造成机体组织损伤中的作用。本项目成功制备了针对NS1蛋白的单克隆抗体并确定了NS1蛋白的精确B细胞表位,利用所制备的单抗确定了NS1蛋白主要定位在细胞质中；应用酵母双杂交技术筛选出与NS1蛋白互作的宿主蛋白, 并利用GST-Pull down验证了该病毒NS1与宿主蛋白RPS7的相互作用并阐明了NS1蛋白的表达能够下调RPS7和MDM2的转录水平，进而导致了P53 蛋白的表达水平升高，最终导致细胞凋亡的发生的相关机制；通过RNA-Seq分析NS1蛋白对鸭胚成纤维细胞mRNA转录水平的影响并进行相关验证，确定了NS1蛋白可激活鸭胚成纤维细胞的模式识别受体（如MDA5和RIG-I），导致宿主细胞内细胞因子（如IFNα, IL-6, 和IL-12等)，转录因子和信号分子(如IRF7, NF-kB和STAT1)和抗原呈递蛋白的大量产生，以抵御病毒复制。