口腔扁平苔藓差异蛋白及化湿行瘀清热中药干预的蛋白质组学研究

The study applies proteomics technology and combined with bioinformatics tools. Differential expressing proteins of oral lichen planus(OLP)are screened through three different biological components of the serum, saliva, tissue in order to determining target protein of OLP.According to Gu Shicheng dialectical thought of "abscess and sore aquired all", although sore belonging to external illness，it is considered that "will first be involved within"and "then occurred in the external". we claim the principle of differential treatment and taking the treatment based on the clinical manifestations of disease. Main clinical manifestation of oral lichen planus are the white stripes and hyperaemia erosion, which caused by cumulated ministerial fire and the rise and diffuse in the oral cavity.therefore, we work out prescription of huashixingyuqingre .With the help of NOD / SCID mice animal model of oral lichen planus, the target protein expression are observated by histological studies, electron microscopy and protein immunoblotting before and after intervention of huangshixingyuqingre decoction. while the target protein expression of the blood and saliva with patients of oral lichen planus are investigated by mass spectrometry and enzyme-linked immunosorbent assay before and after treatment for discussing effect on the target protein and the possible mechanism.The pathogenesis of OLP is further researched at the molecular lever. It is possible for the eraly diagnosis, prevention,biological proteins targeted therapy and prognosis judgment in patients of OLP.In order to provide the experimental basis on prospects of clinical application of huashixingyuqingre prescription.

本研究应用蛋白质组学技术，结合生物信息学手段，通过对血清、唾液、组织三种不同生物成分的研究，筛选出口腔扁平苔藓差异蛋白，进而确定靶蛋白。并依据顾世澄《疡医大全》中的疮疡虽属外证，"必先受于内，然后发于外"的辩证思想，主张临证治病，辨证论治的原则，认为口腔扁平苔藓的主要临证为白色条纹、充血糜烂，是由于相火积郁、升发在口腔，因此，组方"化湿行瘀清热方剂"。借助于NOD/SCID小鼠口腔扁平苔藓动物模型，采用组织学研究、电镜观察及蛋白免疫印迹法分析化湿行瘀清热方剂治疗前后靶蛋白的表达，同时对临床口腔扁平苔藓患者用药前后的血液、唾液采用质谱分析及酶联免疫法，研究化湿行瘀清热方剂对靶蛋白的影响，探讨其可能的作用机制。从而进一步在分子水平上研究扁平苔藓的发病机制，使口腔扁平苔藓的早期诊断、预防、生物蛋白靶向治疗、预后判断趋于可能，为化湿行瘀清热方剂开辟临床应用前景提供实验依据。

口腔扁平苔藓为癌前状态，是一种顽固难治的口腔粘膜病。其病因尚不十分清楚。目前，临床上一般多采用激素、免疫抑制剂治疗，长期应用常出现毒副作用而停止用药。口腔扁平苔藓发病因素的研究及探索中医中药治疗口腔扁平苔藓一直是目前研究的热点。.本研究在前期研究中采用基因芯片技术筛选出OLP相关的142个差异表达基因及其8条相关通路。为了深入研究OLP的发病机制，本研究应用蛋白质组学技术对血清、唾液、组织三种不同生物成分的研究，筛选出OLP差异蛋白，进而确定靶蛋白。中医文献无口腔扁平苔藓病名，与其相关的治疗及研究文献也缺乏，我们参考顾世澄《疡医大全》中疮疡虽属外证，“必先受于内，然后发于外”的辩证思想，遵循临证治病， 辨证论治的原则，认为口腔扁平苔藓是由于相火积郁、升发在口腔蕴湿夹瘀，故拟“化湿行瘀清热方”，临床观察有较好的疗效。并通过检测 NF-κB、Notch-1 在OLP及正常口腔黏膜组织中的表达，探讨了Notch-1/NF-κB 信号传导系统在口腔扁平苔藓病损形成及发展过程中的作用，并观察了化湿行瘀清热方对口腔扁平苔藓Notch /NF-κB信号通路相关细胞因子的影响。采用当前最先进的双向荧光差异凝胶电泳( 2-D DIGE) 和质谱技术筛选、鉴定OLP患者唾液中鉴定出4个差异蛋白质点；在OLP患者血清中鉴定出 12 种差异蛋白质点。并对化湿行瘀清热方治疗口腔扁平苔藓前后，唾液及血清中的差异蛋白进行筛选鉴定，鉴定出唾液中治疗前后6种差异蛋白：分泌型IgA、血清白蛋白、IgM、唾液淀粉酶、碳酸酐酶6、锌α2糖蛋白，治疗前后的血清中存在结合珠蛋白、人抗凝血酶Ⅲ、补体成分 C1 和维生素 D 结合蛋白4种差异蛋白。课题进一步从分子水平研究OLP的发病机制，通过临床病例资料分析观察化湿行瘀清热方的临床治疗效果，为口腔扁平苔藓病因机制和临床治疗探索新思路、新方法。在口腔扁平苔藓动物模型的建立中，已经取得了一定的进展，病变部位已出现黏膜上皮不全角化，棘细胞层轻度增生，基底细胞轻度液化变性，上皮钉突不规则延长，固有层散在淋巴细胞浸润。在后续的实验中将进一步调整外周血淋巴细胞注射量，希望成功建立人PBL-NOD/SCID鼠模型。并在此基础上在鼠口腔粘膜下采用组织匀浆+佐剂针刺划痕法，争取建立OLP动物模型,以期为口腔扁平苔藓的生物学研究及治疗学评价提供体内实验研究平台。