耐受性树突细胞对胶原性关节炎小鼠Tregs和Th17的调控作用及机制

耐受性树突细胞（TDC）表达特征性分子CD11b、CD11c和F4/80，调控Treg和Th功能，调节免疫应答和细胞因子平衡，是参与免疫耐受的关键细胞。类风湿关节炎(RA)发病机制与免疫耐受被破坏密切相关，靶向自身抗原（关节软骨II型胶原（CII））适应性免疫不平衡，体内产生针对CII自身抗体，Th17与 Treg比例失衡，而导致滑膜组织破坏。TDC能否通过呈递抗原，调控Treg和Th17功能，介导免疫耐受，发挥对RA的治疗作用？TDC通过怎样的机制对二者进行调控？目前国内外未见文献报道。为了重建RA免疫耐受，达到"一次用药, 终身受益"的治疗目标，本项目拟建立胶原性关节炎（CIA）小鼠模型，采用基因沉默、Transwell小室和细胞流式术等方法，观察TDC对CIA小鼠的治疗作用、探讨TDC对Treg和Th17的调控作用及机制。为把TDC疗法引入临床治疗RA等自身免疫性疾病提供理论依据。

促炎症细胞与抗炎细胞及其相应的细胞因子间失平衡参与了类风湿关节炎（RA）的病理过程。树突细胞（dendritic cells, DCs）具有免疫原性和耐受性双重作用，CD11b+ F4/80+DCs是未成熟树突细胞（Immature DCs, iDCs) ，具有耐受特性，促进Tregs生成，在外周和中枢耐受中发挥重要作用。Th17细胞分泌促炎因子IL-17介导炎性反应和关节损害。促进巨噬细胞产生IL-1和TNF。利用细胞免疫疗法治疗RA，重建免疫耐受机制，已成为一个新策略。本项目从体外诱导分离小鼠BM CD11b+F4/80+iDC，研究BM CD11b+F4/80+iDC对小鼠胶原性关节炎（collagen induced arthritis, CIA）的治疗作用并进一步探讨BM CD11b+F4/80+ iDC对Tregs和Th17功能的调控机制。结果显示，1. rmGM-CSF和rmIL-4体外诱导的BM CD11b+F4/80+iDC高表达TLR-2和IDO，培养上清IL-10和TGF-β1水平较高，而显示耐受特性。2. BM CD11b+F4/80+iDC对小鼠CIA有治疗作用，该治疗作用可能通过BM CD11b+F4/80+iDC抑制胸腺细胞增生，降低CIA小鼠血清炎性因子水平并升高抗炎因子水平，调节CIA小鼠Th17和 Tregs的平衡来实现的。3. BM CD11b+F4/80+iDC体外促进Tregs分化，促进T细胞表达CTLA-4、Foxp3 mRNA和Helios mRNA。抑制ConA诱导的T细胞增殖反应；降低共培养T细胞中Th17细胞百分含量，降低共培养上清IL-17A水平及IL-17 mRNA和RORγt mRNA的表达，而抑制Th17细胞的功能。结论，rmGM-CSF和rmIL-4体外能够成功诱导BM CD11b+F4/80+iDC，并显示耐受特性。BM CD11b+F4/80+iDC对小鼠CIA有治疗作用。BM CD11b+F4/80+iDC对CIA的治疗作用与诱导Tregs细胞的产生，抑制Th17细胞的功能有关。本研究首次成功诱导小鼠骨髓源耐受性CD11b+F4/80+iDC，并探讨了BM CD11b+F4/80+iDC对小鼠CIA的治疗作用及部分机制。耐受DC对Treg和效应T细胞功能的调控为RA治疗提供了潜在前景。